Памм индексы 4 ноября 2018 года: Индексы на IV квартал 2018 года

Содержание

ПРОГНОЗНЫЕ ИНДЕКСЫИЗМЕНЕНИЯ СМЕТНОЙ СТОИМОСТИ ОБОРУДОВАНИЯ НА IV КВАРТАЛ2018 ГОДА

Приложение 4

к письму Минстроя России

от 15.11.2018 N 45824-ДВ/09

 

 

(без НДС)

 

Отрасли народного хозяйства и промышленности

Прогнозные индексы на оборудование к уровню цен по состоянию на:

Экономика в целом

Электроэнергетика

Нефтедобывающая

Черная металлургия

Цветная металлургия

Нефтеперерабатывающая, химическая и нефтехимическая

Тяжелое, энергетическое и транспортное машиностроение

Приборостроение

Автомобильная промышленность

Тракторное и с/х машиностроение

Лесная и деревообрабатывающая и целлюлозно-бумажная

Строительных материалов

Микробиологическая

Полиграфическая

Сельское хозяйство

Строительство

Торговля и общественное питание

Жилищное строительство

Бытовое обслуживание населения

Здравоохранение

По объектам непроизводственного назначения

 

 

Открыть полный текст документа

Рейтинг Инвестиций — Лучшие Инвестиции 2021 на Invest-Rating.ru

Здоровье
ИИИ: 8.9, Д/Р: 2/4
Форекс
ИИИ: 8.7, Д/Р: 9/9
Нефть, газ, сырье
ИИИ: 8.6, Д/Р: 6/4
Акции
ИИИ: 8.5, Д/Р
: 7/5
Биткоин
ИИИ: 8.4, Д/Р: 8/6
Облигации
ИИИ: 8.3, Д/Р: 5/4
Накопительные программы
ИИИ: 8.2, Д/Р: 3/2
ИИС
ИИИ: 8.1, Д/Р: 7/4
Недвижимость
ИИИ: 8, Д/Р: 5/5
Криптовалюты
ИИИ: 8, Д/Р: 9/10
Наличные деньги
ИИИ: 7.9, Д/Р: 0/1
Банковские депозиты
ИИИ: 7.8, Д/Р: 4/2
ПИФы
ИИИ: 7.8, Д/Р: 6/5
Структурные ноты
ИИИ: 7.7, Д/Р: 6/6
ПАММ счета
ИИИ: 7.7, Д/Р: 8/8

Недельный отчет ПАММ счетов fintechnology 14 c 28.10.18 по 03.11.18

АМаркетс ( www.amarkets.org/investment/pamm-rating/id1540/ ) 
— возраст ПАММ-счета — 246 дней 
— величина управляемого капитала составляет $278 320,47 (максимум за всю историю счета), за неделю пополнения $464,00 снятия $3441,92  
— Общая доходность счета (по кривой доходности брокера) с учетом текущей просадки +35,78%, реальная доходность счета за неделю +15,53%  
— Текущий торговый результат (прибыль — просадка) +$47 007,00 
— Совокупный итог по закрытым и частично зафиксированным сделкам увеличился на $7807,75 и составляет $83 892,18  
— Доступные средства $241 435,29 рабочая просадка -12,00% (низкая). 
— Рабочая загрузка депозита (используемое кредитное плечо) 15,94% 
Рейтинг АМаркетс по фирменному показателю брокера T-score (учитывает совокупность баллов набранных по показателям счета) — 15 место 
— 1 место по величине управляемого капитала. 

Альпари ( alpari.com/ru/investor/pamm/410228/ ) 
— возраст ПАММ-счета — 242 дня 
— величина управляемого капитала составляет $380 287,38 (максимум за всю историю счета), за неделю пополнения $3710,36 снятия $6610,47  
— Общая доходность счета (по кривой доходности брокера) с учетом текущей просадки +61,48%, реальная доходность счета за неделю +10,64%  
— Текущий торговый результат (прибыль — просадка) +$82 028,47 
— Совокупный итог по закрытым и частично зафиксированным сделкам увеличился на $21 800,31 и составляет $78 518,23  
— Доступные средства $383 797,62 рабочая просадка 0% (положительная).  
— Рабочая загрузка депозита (используемое кредитное плечо) 10,35 

Рейтинг Альпари (по совокупности баллов) — 172 место. 
— 9 место по величине управляемого капитала. . 

Альфа-форекс (https://my.alfaforex.com/ru/public/pamm/view/6538?liquidation=1#graphics) ПАММ-счет закрыт 24.04.2018 
— ПАММ-счет отработал — 813 дней. 
— величина управляемого капитала на момент закрытия ПАММ составила $400 436,75 (максимум за всю историю счета $581 409 
— Общая доходность счета (по кривой доходности брокера) с учетом текущей просадки 396,04% 
— Итоговый торговый результат составил +$280 734,07 

Итоговые показатели работы на ПАММ-счетах за всю историю: 
— общий управляемый капитал за неделю увеличился на $23 730,03 и составляет $658 607,85(максимум за всю историю работы на ПАММ-счетах) 
— совокупный итог по закрытым и частично зафиксированным сделкам за неделю увеличился на $30 608,06 и составляет +$443 144,48 (максимум за всю историю работы) 

— Текущий торговый результат (прибыль — текущая просадка) за неделю увеличился на $70 020,10 и составляет +$409 769,54(максимум за всю историю работы)

Мой опыт инвестирования в Памм-счета

Привет, друзья! В прошлом посте я рассказывал про свои впечатления от зеркального фотоаппарата Canon 550d, а сегодня напишу отзыв об инвестировании в Памм-счета компании Альпари (Alpari). Сразу хочу подчеркнуть, что это не реклама данного брокера. Также в статье вы не увидите реферальных (партнерских) ссылок.

Это просто пост о том, как я инвестировал в памм-счета. Сейчас это достаточно модное направление пассивного заработка. Возможно, мой опыт окажется кому-то полезным.

Что такое памм-счета?

Как известно, на рынке форекс торгует множество трейдеров. У небольшой их части получается торговать прибыльно на долгосрочном отрезке. Памм-счета позволяют доверять денежные средства под управление трейдерам. Они, в свою очередь, берут определенный процент с полученной прибыли (обычно 30-50%).

Например, вы вложили в трейдера А 1000$, который берет за управление 30%. За год он сделал 100% или удвоил депозит. Прибыль составила 1000$. Он себе заберет 300$, а вы можете снять 1700$. Такая нехитрая математика 

. Если он торгует в убыток, то вы теряете свои деньги.

Здесь я никого не агитирую инвестировать в памм-счета. Тем более для подобных инвестиций нужно выделять только свободные денежные средства, которые не отразятся на вашей жизни в случае их потери. Рынок форекс очень рискованный, поэтому это необходимо знать не только трейдерам, непосредственно торгующем на нем, но еще и инвесторам, которые вкладывают деньги.

Почему я выбрал Альпари?

Еще раз повторюсь, что это не реклама данного брокера ;). Перед тем, как я начал инвестировать в памм-счета, конечно же, прочитал много информации, посетил один вебинар, а также прошелся по всем популярным компаниям, которые предоставляют памм-сервис. Не знаю, как сейчас, но тогда Альпари был единственным брокером, который показывал наиболее исчерпывающую информацию по торговле трейдеров.

Главной дополнительной статистикой была загрузка депозита, которая во многом характеризует торговлю на счете. Загрузка депозита — это процентное соотношение средств, используемых в торговле. Чем больше загружен депозит, тем, как правило, выше риск потерять все деньги в короткий. Разберу на примере. Первый памм-счет, в который я инвестировал (15 апреля 2011 года) 100$ имел, пожалуй, один из самых красивых графиков доходности, не считая последнего дня, конечно :).

Стабильный подъем в течение 4-х месяцев. Но опытные люди знают, что это больше плохо, чем хорошо. Последний день этого памм-счета доказывает это. Посмотрим на график той самой загрузки депозита и доходности.

Оказывается, этот трейдер применял популярную на форексе стратегию мартингейла, которая имеет отрицательное математическое ожидание, то есть убыточно в долгосрочной перспективе. Ее суть — увеличение объемов лотов убыточных сделок. На графике ни одного убыточного дня кроме последнего :).

Инвестировал в него, я конечно, по незнанию. Во-первых, загрузка депозита 60-100% — это достаточно опасно. Во-вторых, высокие просадки в течение дня (зеленые свечи, направленные вниз на первом графике предыдущего изображения).

Кстати, я не потерял здесь свои 100$, а вернул их с небольшой прибылью (1-2$). Дело в том, что поставил ограничение убытков на определенном уровне (уже не помню каком). Если доходность памм-счета падает ниже него, то подается заявка на закрытие вашего счета, а оставшиеся деньги перечисляются на аккаунт. Заявка исполняется не сразу, а в течение некоторое времени (ролловера) — 1-2 раза в день. 26 апреля 2011 года (последняя зеленая свеча вниз) создалась заявка на закрытие счета. Так вот пока она висела на исполнении, трейдер отыграл убыток и принес небольшую прибыль. В итоге я решил больше не рисковать. Меньше повезло тем, кто не вывел средства до последней сделки.

Корзина и яйца

Фраза «Не держите яйца в одной корзине» справедлива и в случае инвестирования в памм-счета. Я пробовал вкладывать в 20 счетов (не сразу, конечно).

Пробовал как агрессивные счета, так и консервативные. Ниже результаты по каждому счету.

№1 — Crash322:200106.

Итог — +1,6%

№2 — TanyaV.

Итог — -21,5%

№3 — TFTC.

Итог — -31%.

№4 — I like it.

Итог — -35%.

№5 — Trebor.

Итог — -22,5%.

№6 — Red BOX.

Итог — +10%.

№7 — PetrOFF+.

Итог — +5%. Тут еще находятся средства в управлении.

№8 — mmx.

Итог — -10%.

№9 — avp555.

Итог — -10%.

№10 — Petrov_Ivan.

Итог — +12%. Тут еще находятся средства в управлении.

№11 — Bamboo Capital.

Итог — +18%.

№12 — highprofits1.

Итог — +14%.

№13 — Voinigor.

Итог — -67%. Тут еще находятся средства в управлении. Единственный ПАММ, где я почему-то не поставил ограничение убытков.

№14 — Marlboro.

Итог — +4%. Здесь также еще находятся деньги.

№15 — ice12.

Итог — -29%.

№16 — KSV.

Итог — -20%. Здесь также еще находятся деньги. Здесь хотел выйти на максимуме, но что-то удержало от этого. Сейчас пожинаю плоды :).

№17 — Invincible_trader.

Итог — +5%.

№18 — nolose.

Итог — -60%.

№19 — Exchange Adviser.

Итог — +1%.

№20 — ProsTrade.

Итог — -20%.

Некоторые замечания:

  1. Многие памм-счета были закрыты автоматически при достижении уровня, на котором я ставил ограничение убытков. В большинстве случаев это было эффективно.
  2. Могут быть небольшие погрешности в связи с тем, что в некоторые паммы я вводил, выводил и опять вводил.
  3. Могут быть визуальные неточности (но цифрах их нет, за исключением 2-го пункта) из-за того, что в паммы периодически добавлялись средства.

В итоге получилось, что практически за год инвестирование в памм-счета принесло мне -9,2% или убытков на такую же величину процентов.

Какие я сделал выводы?

  • Данный вид вложения средств довольно таки неоднозначный. С одной стороны, он может приносить доход выше банковских процентов, с другой — может принести и убыток.
  • Если деньги можно эффективно вложить в другие места, например, в свои интернет-проекты, то лучше сделать именно так.
  • Если инвестировать деньги в памм-счета, то в проверенных и «старых» трейдеров, которые уже зарекомендовали себя, хотя бы в течение 9-12 месяцев работы.
  • Яйца лучше раскладывать по разным корзинам, но число корзин тоже должно быть умеренно. В моем случае — 20. В итоге я понял, что это много.
  • Всегда ставить уровень ограничения убытков. Если доходность памм-счета растет, то передвигать его вверх каждые 2-3 месяца.
  • Возможно, у других брокеров существуют костяк более профессиональных трейдеров.

Что вообще думаете о памм-инвестировании? Уверен, что многие из вас также вкладывали в ПАММы. Как у вас обстоят или обстояли дела? С нетерпением жду ваших отзывов и комментариев ;).

P.S. Не уверен, что данный метод можно назвать инвестированием на 100%. В связи с этим ставлю знак равно между инвестированием и передачей денег в доверительное управление на рынке форекс.

Отзывы о Альпари — Форекс брокер alpari.ru

Наверно, каждый инвестор, живущий на территории СНГ, знает или просто слышал отзывы о брокере Альпари (официальный сайт). Вообще название сайта и компании Альпари, согласно википедии, переводится как «равенство текущей и номинальной стоимости ценных бумаг». Именно с Alpari limited началось моё знакомство с валютным рынком форекс в 2011 году, когда я еще даже не был зарегистрирован на форуме mmgp. В то время я всерьёз увлекся хайпами-высокопроцентниками и, поторговав немного на демо счете, благополучно забросил свой аккаунт. Прошло чуть больше года, как я вновь обратился к услугам Альпари. На этот раз меня заинтересовал ПАММ сервис компании, который, с точки зрения анализа и управления инвестициями, является самым качественным среди других форекс брокеров.

В этом обзоре традиционно познакомимся с историей компании Альпари, разберем сильные и слабые стороны брокера и почитаем отзывы Alpari действующих трейдеров и инвесторов.

Форекс брокер Альпари — Alpari limited

Компания начала свою работу в конце 1998 года, практически сразу после дефолта. Прошло почти 15 лет, и теперь форекс брокер Альпари представлен в 22 странах мира, совокупный торговый оборот за первое полугодие 2013 года составил около 788 млрд. долларов, который генерируют более 500 тысяч клиентов по всему миру. Кстати, Alpari первый и чуть ли не единственный брокер в России, раскрывший свои операционные показатели.

В 2000 году Альпари начала сотрудничать с разработчиками торговых платформ MetaQuotes Software, в результате чего у всех клиентов компании появилась возможность торговать на уникальной для того времени платформе MetaQuotes. Именно эта платформа стала технической базой для создания самого популярного торгового терминала MetaTrader, на котором я сейчас торгую.

Сейчас компания Альпари имеет региональные представительства практически во всех странах ближнего зарубежья (по отношению к России), а также в странах северной и латинской Америки и Азии. Для того, чтобы понять масштабы работы компании, достаточно взглянуть на карту с расположением офисов-представительств. Alpari — один из самых крупных брокеров в мире.

ПАММ счета брокера Альпари, отзывы инвесторов о сервисе

В 2008 году Альпари стала первым брокером территории Российской Федерации, запустившим ПАММ сервис — сервис автоматического распределения прибыли между инвестором и управляющим трейдером. Это можно считать историческим событием в мире инвестиций и форекса, т.к. до этого инвестирование в форексе было возможно только в рамках доверительного управления, когда инвестор напрямую договаривался с трейдером, что было очень неудобно ни управляющим, ни инвесторам. После создания ПАММ сервиса другие брокеры стали с успехом копировать эту схему.

 Вот видео от Альпари про ПАММ счета.

Я инвестировал в ПАММ счета Альпари несколько лет (до 2020 года) и думаю, что мои отзывы о работе сервиса совпадают с мнением большинства инвесторов. ПАММ сервис разработан на достаточно высоком уровне по отношению к сервисам других брокеров моего портфеля. Например, в отличие от Форекс-Тренда, в Альпари можно анализировать статистику ПАММ счетов с помощью различных графиков. Да и сам рейтинг выглядит интуитивно понятным, в отличие от рейтинга ПАММ счетов Пантеон-Финанс. Для анализа ПАММ счетов Альпари существует удобный сервис Pammin.ru, в котором есть все для полноценного анализа статистики счета.

Напомню, что никакая текущая прибыль не может гарантировать прибыль в будущем, поэтому помните про диверсификацию инвестиционного портфеля и не нарушайте золотых правил инвестора.

После того, как мы разобрались с основной деятельностью компании, самое время почитать отзывы реальных клиентов Alpari.

Альпари форекс отзывы инвесторов о брокере Alpari limited

Отзывы Альпари занимают лидирующее место по количеству отзывов о форекс брокерах в сети. Когда я начал изучать отзывы о компании Alpari, я буквально чуть не утонул в море постов и комментариев на форумах, в том числе, и на mmgp. Я потратил несколько часов на изучение отзывов об Альпари и могу сказать, что средняя оценка по этой кухне более 4 балов (по 5-ти бальной шкале), что достаточно много, если учесть огромное количество информации.

Для экономии вашего времени на поиск и анализ информации приведу несколько отзывов об Альпари здесь:

А вот достаточно забавный отзыв по Alpari с форума mmgp:

Чем больше я изучаю отзывы клиентов различных компаний, тем больше понимаю, что ведется незримая информационная война среди конкурентов на рынке предоставления брокерских услуг на форексе. Все же больше всего я доверяю отзывам Alpari с инвестиционных форумов, таких, как mmgp. Так что если у вас появится желание поизучать отзывы реальных трейдеров и инвесторов Альпари, советую, прежде всего, обратить внимание на форум mmgp.

Для того, чтобы максимально структурировать информацию по брокеру Alpari limited, перечислю основные достоинства и недостатки брокера.

Основные преимущества форекс брокера Альпари

  • Альпари — один из самых крупных форекс-брокеров в мире

Почти каждую неделю мне сыплются письма с предложениями пропиарить какого-нибудь нового брокера, который только вчера начал работать. Торговля с такими брокерами больше похожа на казино, в котором невозможно выиграть. Инвестируя и торгуя у Альпари, инвесторы и трейдеры могут быть уверены, что брокер не сольется на следующий день.

  • Наличие регистрационных документов и лицензий

Компания Альпари, как и большинство брокеров в СНГ, зарегистрирована в офшоре (Гренадины). Компания «Альпари Брокер» (партнер Alpari Limited) имеет лицензии профессионального участника рынка ценных бумаг на осуществление брокерской, дилерской деятельности на территории РФ. Кстати, именно Alpari были одними из инициаторов создания Центра регулирования внебиржевых финансовых инструментов и технологий (ЦРФИН), того самого регулятора, который добавляет в черный список инвестиционные проекты, похожие на финансовые пирамиды (напомню, что в числе их были Vladimirfx, Gamma IC, Pegas, Vivara, Milltrade и др.)

Подробно посмотреть регистрационные документы можно здесь.

  • Большой выбор торговых платформ для торговли

Для ПК предусмотрены классические платформы MT4, MT5.  Для мобильных устройств разработаны специальные приложения на базе MT4,5. Также можно использовать веб-платформу для торговли бинарными опционами OptionTrader.

  • Неплохие торговые условия

Спреды начинаются от 0,1 пункта. Подробно посмотреть торговые условия можно здесь.

  • Поддерживаются разные валюты депозита

Становясь клиентом компании, можно выбрать в качестве валюты депозита рубли, доллары, евро и даже золото! Эта возможность позволяет диверсифицировать валютные риски.

  • Отсутствует минимальная сумма для депозита

На всех типах счетов отсутствует требование минимального депозита. Т.е. можно начать торговать с 50$ на счете. У большинства брокеров минималка 100$.

  • Центовый счет

Отдельно стоит отметить возможность торговать на центовом счете. Он будет удобен для начинающих трейдеров с небольшим депозитом.

  • Высшая школа трейдинга в Альпари

Именно так называются обучающие курсы по трейдингу на форексе от Альпари. Для всех клиентов Альпари обучение бесплатное, причем курсы проходят не только в формате вебинаров, но и оффлайн лекций, что гораздо эффективней, правда, только для москвичей.

  • Большой выбор платежных систем для пополнения и снятия денег

Для транзакций доступны самые распространенные платежные системы, такие как Webmoney, Qiwi, Яндекс Деньги, RBK Money, Альфа клик, Банковские переводы.

 Недостатки форекс брокера Альпари

  • Присутствуют комиссии при пополнении и снятии денег

Выгоднее всего пополнять и снимать деньги через систему Webmoney, в этом случае комиссия будет 0,8%. При использовании остальных платежных систем комиссия по транзакциям может достигать 3-5%. Так что перед тем, как пополнять счет в Alpari рекомендую ознакомиться с комиссиями здесь.

  • Мало успешных управляющих ПАММ счетами в Альпари

Чуть выше я перечислил управляющих, в которых я инвестировал. Помимо них в рейтинге ПАММ счетов брокера Альпари едва ли наберется десять счетов с привлекательным отношением доходности и риска. Думаю, что со временем ситуация будет меняться в лучшую сторону.

Регистрация личного кабинета Альпари (Alpari limited)

Для того чтобы зарегистрировать личный кабинет в Alpari, необходимо выполнить следующие действия:

1) Перейти на сайт Альпари.

2) Шаг 1. Заполните регистрационную форму реальными данными. При подозрении на взлом вашего аккаунта вас попросят подтвердить данные сканами документов.

3) Шаг 2. Заполните завершающую часть анкеты. Введите номер паспорта или другого документа, удостоверяющего вашу личность.

Если данная статья оказалась вам полезна и вы хотите поддержать развитие ленивого блога, то в поле ID представляющего брокера пропишите 1215322.

Прописав этот код, вы не только ничего не потеряете (т.к. агентская система никак не касается клиентов), но и сможете рассчитывать на мою поддержку при инвестировании.

После этого останется лишь подтвердить номер телефона или электронную почту, которую вы указали при регистрации. На этом процесс регистрации окончен, и вы можете считать себя полноценным клиентом компании Альпари.

 P.S.

Ну вот, наверно, и все, что необходимо знать о брокере Альпари для того, чтобы начать торговать или инвестировать. Надеюсь, что мой отзыв о форекс брокере Alpari поможет читателям ленивого блога справиться с начальными трудностями при торговле и инвестировании. Если столкнетесь с какими-либо проблемами, буду рад помочь разобраться в комментариях.

Всем профита!

реальные отзывы клиентов о брокере Alpari

Типичные отзывы клиентов об Альпари

Если говорить о реальных, не подставных отзывах об Альпари, то большинство жалоб можно разделить на несколько групп.

На Альпари невозможно заработать

Трейдеры оставляют отзывы, что из-за постоянных зависаний терминала и проскальзываний сделки закрываются не по той цене, срабатывают ложные стоп-лоссы или наоборот, стопы не срабатывают. В итоге результаты сделок получаются заметно хуже запланированных и торговля идет в минус. В итоге трейдеры пишут отзывы, что Альпари специально сливает их депозит.

На Альпари действительно тяжело приходится скальперам. Считается, Альпари плохо подходит для торговли на очень коротких интервалах, поэтому скальперы предпочитают других брокеров, например FxOpen. У тех же, кто торгует средне и долгосрочно, обычно таких проблем не возникает.

Альпари — кухня

Трейдеры любят писать, что Альпари — типичная кухня, сделки не выводятся на реальный форекс, компания заинтересована в убытках трейдеров, сама рисует свечи.

На самом деле это поверхностный взгляд. На счетах standard Альпари действительно перекрывает сделки трейдеров внутри компании, а на межбанк выводит только нетто остаток. Дело в том, что на стандартных счетах торгует очень много трейдеров, которые легко могут перекрывать друг друга, поэтому Альпари сложно отказаться от этой, отчасти кухонной, схемы работы. Но это не означает, что Альпари рисует свечи или что компания заинтересована в убытках трейдеров.

У Альпари есть счета ECN, на которых абсолютно все сделки выводятся на межбанковский рынок. На данный тип счета переходят трейдеры, которые работают с большим оборотом или просто хотят уйти от кухонных схем. Поэтому для объективной картины ищите отзывы трейдеров Альпари, торгующих на ECN.

Чаще всего, негативные отзывы трейдеров об Alpari связаны просто с недостатком торгового опыта — неверным расчетом объема сделки, не учетом проскальзываний и т. п.

На Альпари плохое исполнение

Встречаются также отзывы о плохом исполнении — постоянных проскальзываниях, реквотах и т. п.

Отчасти это справедливо, проскальзывания есть у всех Форекс брокеров и Альпари — не исключение. Часто эти отзывы появляются из-за неверного выбора типа счета. Опытные трейдеры всегда готовы к проскальзываниям на новостях, тонком рынке и при рыночном исполнении, а идеальное исполнение бывает только в теории. При этом на счетах Альпари торгует большое число трейдеров, которые отчасти перекрывают друг друга и улучшают исполнение.

Опытный трейдер всегда закладывает торговые условия брокера в параметры своей торговой системы. У всех брокеров отличаются торговые условия (проскальзывания, спреды и др.), система, работавшая у одного форекс брокера, может перестать работать у другого и наоборот. Показатели могут измениться даже при смене типа счета — многие трейдеры начинают торговать на счетах Standard, затем переходят на ECN, и при рыночном исполнении показатели их торговой системы улучшаются или ухудшаются.

Альпари сливает ПАММ-счета

Инвесторы жалуются, что нет нормальных ПАММ-счетов, на которых можно заработать, все только и делают, что специально сливают их деньги.

Чаще всего, инвесторы теряют деньги из-за неверного выбора ПАММ-счетов. В рейтинге Альпари большинство ПАММ-счетов, которые показали хороший доход за последние полгода — год. Очевидно, выбирать ПАММы на основе только этих данных опасно — большинство ПАММов из топа рейтинга не покажут такой же результат за следующий год. В итоге инвесторы не получают ожидаемого дохода или теряют деньги, идут писать плохие отзывы о ПАММ-счетах.

В реальности, на ПАММ-счетах действительно заработать непросто. Прежде всего, нужно научиться правильно выбирать ПАММ-счета. На Альпари собраны лучшие управляющие из тех, кто работает на ПАММах, а сумма инвестиций в ПАММ-счета уже несколько лет не опускалась ниже 10 млн долларов.

Вот списки ПАММ-счетов Альпари, которые говорят лучше отзывов:

Лучшие ПАММ-счета по прибыли инвесторов

Архив закрытых и слитых ПАММ-счетов

Чтобы оставить объективный отзыв об Альпари, о ее ПАММ-счетах, необходимо поработать с ними хотя бы полгода. То же относится и к торговле. Все достоинства и недостатки становятся очевидны через несколько месяцев. Объективный отзыв от опытных трейдеров и инвесторов звучит примерно так: «На Альпари, как и везде, есть свои преимущества и недостатки, заработать можно, но для этого нужно потрудиться». В действительности же Alpari — крупнейший в России и СНГ форекс брокер с наибольшим числом клиентов, торговым оборотом и суммами на ПАММ-счетах.

Неудобные опционы

О фиксированных контрактах Альпари часто пишут, на них неудобный терминал, сроки экспирации, мало активов, видов опционов.

Отчасти пишут по делу, fix contracts Alpari Limited — относительно новый продукт, работает с конца 2013 года и на базе их партнера, компании Binary Products Limited. Поэтому не все еще отлажено, но платформа развивается активно вместе со спросом на нее.

Отзывы о штрафах Альпари, банкротстве, лишении лицензий

В интернете также часто обсуждаются отзывы о штрафах компаний Alpari от FSA, NFA и FFAJ, о прекращении действия кипрской лицензии компнии, банкротстве Alpari UK, отказе ЦБ РФ в выдаче лицензии.

Все эти события имели место, но совсем не в том виде, в котором они преподносятся. Это не повод для гордости, но и не трагедия, а вполне рабочие моменты, которые случаются в судьбе каждого крупного брокера. Разбор этих отзывов смотрите в видео отзыве и читайте в статье о заказных отзывах об Альпари.

Видео «Вся правда об отзывах Альпари»

Финансовые грабли: About

2

Валюты, форекс и криптовалюты

Валюта – это деньги; обычно под валютой понимаются денежные знаки иностранных государств (доллары, евро, йены и т.д.).

Forex – оптовый рынок торговли валютой. Минимальный лот покупки или продажи на нем составляет около 100 000 долларов США. Сделки на рынке совершают крупные организации, а не физические лица. 

Некоторые компании предоставляют возможность торговать валютой «обычным» людям, выступая посредниками между торговой площадкой и клиентом. Такие организации называются форекс-дилерами. Дилер предоставляет компьютерную торговую систему, которая осуществляет расчеты между клиентами (внутренний клиринг) по заложенным внутри системы алгоритмам. Когда клиент форекс-дилера совершает торговую операцию, на рынке Forex ничего не происходит – прибыль и убыток рассчитывается электронной системой форекс-дилера.

Криптовалюта – вид платежного средства, существующий в виде программного кода. Как и другую валюту, ее можно покупать и продавать. Однако сделать это бывает непросто из-за слабого правового регулирования, а купить на нее товары – еще сложнее.

Бинарные опционы – это ставка на то, что стоимость актива увеличится или уменьшится. В большинстве случаев вы не совершаете покупку или продажу актива, а, как в букмекерской конторе, играете против брокера.

Полезная информация
  • Стоимость криптовалют сильно колеблется, поэтому вложение в них похоже на лотерею. Из-за слабого законодательного регулирования и неразвитой инфраструктуры риски потери денег высоки. 
  • Показатели прошлой доходности – плохой ориентир для принятия решений о вложении средств в актив, в том числе криптовалюту. Более того, если актив слишком быстро растет и становится очень популярным, вполне вероятно, что за быстрым ростом последует обвал. 
  • Торгуя через форекс-дилера, вы не являетесь участником валютного рынка, а играете против алгоритма компании. Форекс-дилеры могут манипулировать ценами – доказать обман на практике сложно. Торговля на форекс считается высокорискованной.
  • ПАММ-счет у форекс-дилера позволяет «привязать» свой счет к действиям другого человека (управляющего): если он совершает покупку, ваш счет будет так же совершать покупку. Но это все тот же рынок форекс: даже если некоторым управляющим везет, рано или поздно это закончится.
  • Бинарные опционы – рискованный финансовый инструмент. Получите ли вы выплату в случае выигрыша, по сути зависит от добросовестности брокера, а возможности надзорных органов по регулированию подобных брокеров ограничены. 
Дополнительные материалы
  • Подробнее о валюте в Учебном пособии по финансовой грамотности
  • Подробнее о рынке форекс в Учебном пособии по финансовой грамотности
  • Подробнее о криптовалюте в Учебном пособии по финансовой грамотности

306 PÉREZ ART MUSEUM MIAMI

Этот проект был разработан в сотрудничестве с лицензированным в штате Флорида архитектором, выступающим в качестве «Архитектора рекордов». Herzog & de Meuron не имеет лицензии на занятие архитектурой в штате Флорида.

Команда Herzog & de Meuron:
Партнеры: Жак Херцог, Пьер де Мерон, Кристин Бинсвангер (ответственный партнер)
Команда проекта: Чарльз Стоун (партнер), Кентаро Исида (партнер, менеджер проекта), Стефан Хернер (партнер, проект) Менеджер), Адриана Мюллер, Ахмад Реза Шрикер, Дэкён Джо, Дара Хуанг, Гюнтер Швоб (Мастерская), Хьюго Моура, Ида Рихтер Брандструп, Джек Бро, Джейн Барлоу (юрист), Джейсон Францен, Джереми Пёрселл, Джоана Анес, Маргарида Кастро, Масато Такахаши, Мехмет Ноян, Нильс Сандерсон, Роман Аэби (Мастерская), Силья Эберт, Сунку Канг, Валентайн
Отт, Вей Сун, Юичи Кодай, Юко Химено

Клиент:
Художественный музей Майами; Мистер.Томас Коллинз

Представитель клиента:
Энди Клеммер, Роберт Портнофф, Paratus Group, Нью-Йорк, США

Планирование:
Консультант по дизайну: Herzog & de Meuron, Базель, Швейцария
Исполнительный архитектор: Handel Architects, Нью-Йорк , Нью-Йорк, США
Консультант по затратам: Stuart-Lynn Company, Нью-Йорк, Нью-Йорк, США
Проектирование систем отопления, вентиляции и кондиционирования воздуха: Аруп, Лондон, Нью-Йорк, Великобритания, США
Ландшафтный дизайн: GEO Architectonica, Майами, Флорида, США
Проектирование конструкций: Arup , Лондон, Нью-Йорк, Великобритания, США
Висячие сады: Патрик Блан, Париж, Франция
Сантехника / противопожарная защита: JALRW, Дорал, Флорида, США
Строительное проектирование (местное): Дуглас Вуд, Корал-Гейблс, Флорида, США

Консультации:
Акустика: Harvey Marshall Berling Associates, Нью-Йорк, Нью-Йорк, США
Гражданское строительство: инженер ADA, Дорал, Флорида, США
Проектирование фасадов: Фронт, Нью-Йорк, Нью-Йорк, США
Консультант по освещению: Arup, Лондон, Нью-Йорк, Великобритания, США
Секю Консультант по рити: Lane Consultants, Гринвуд-Виллидж, Колорадо, США
Консультант по устойчивому развитию: Transsolar Energietechnik GmbH, Штутгарт, Германия
Вертикальный транспорт: Jenkins & Huntington Inc, Нью-Йорк, Нью-Йорк
Консультант по кодам: Schirmer Engineering, Уайт-Плейнс, Нью-Йорк, США
Консультант по бетону: Реджинальд Хаф, Нью-Йорк, Нью-Йорк, США
Консультант по тканям: Мишель Ронделли, Цюрих, Швейцария
Консультант по дереву: Стивен Смульски, Шутесбери, Массачусетс, США

Данные о здании:
Площадь участка: 153’074 кв.футов / 14 221 кв.м
Общая площадь: 119 749 кв.м / 11 125 кв.м
Количество уровней: 4
Площадь основания: 92 545 кв.м / 8 598 кв.м
Длина: 384 футов / 117 м
Ширина: 240 футов / 73 м
Высота: 70 футов / 21 м

Использование / Функции:
Выставочные площади: 33’260 кв. Футов / 3090 кв. М.
Образовательные: 3’660 кв. Футов / 340 кв. М.
Аудитория: 2’730 кв. M Foundation, крупнейшая лаборатория патологии в регионе Юго-Восточный Брабант в Нидерландах, объявила сегодня о планах по совместному преобразованию всех операций ПАММ-анализа тканей в полностью цифровую диагностику.Фонд PAMM также внесет свой вклад в разработку программного обеспечения для интеллектуального анализа изображений, которое поможет идентифицировать и количественно определять раковые клетки в образцах тканей. Благодаря сотрудничеству ПАММ и Philips стремятся к дальнейшему повышению эффективности и качества диагностики, что в конечном итоге приведет к улучшению ухода за пациентами.

Патологи играют решающую роль в обнаружении и диагностике широкого спектра заболеваний, включая рак. Растущее число случаев рака, старение населения и стремительный прогресс в области персонализированной медицины привели к значительному увеличению сложности патологической диагностики и увеличению нагрузки на патологоанатомов.Цифровая визуализация образцов тканей, которые патолог обычно должен просматривать под микроскопом, позволяет патологу просматривать и оценивать образцы тканей, не имея физических образцов перед собой. Например, он позволяет просматривать образцы в любом месте и более чем одним человеком одновременно, что позволяет патологоанатомам быстро проконсультироваться с (под) специалистом в другой части мира или удобно обмениваться изображениями во время встреч междисциплинарных групп. без необходимости физической транспортировки образцов тканей.Такие преимущества позволяют патологам работать более эффективно и результативно.

Помимо повышения операционной эффективности, ПАММ также ожидает значительного улучшения качества диагностики за счет использования программного обеспечения для распознавания изображений. Для этого ПАММ работает с Philips. Это программное обеспечение призвано помочь патологам лучше оценивать биомаркеры, которые указывают на изменения в тканевых белках и ДНК.

В рамках преобразования в цифровую патологию PAMM планирует создать цифровой архив, используя сверхбыстрый сканер Philips IntelliSite Pathology Solution для оцифровки 400 000 образцов тканей, которые он обрабатывает каждый год.Этот цифровой архив станет важным источником информации для разработки будущего программного обеспечения для распознавания изображений.

Новости — Regen Projects

25 февраля — 31 октября 2017 г.

Палм-Спрингс, Калифорния

www.dougaitkenmirage.com

MIRAGE — это установка для установки в пустыне Южной Калифорнии. Используя форму загородного американского дома в стиле ранчо, скульптура состоит из отражающих зеркальных поверхностей.MIRAGE воплощает узнаваемый и повторяющийся загородный дом в сущности его линий, отражающихся и исчезающих в огромном западном ландшафте. Открываясь 25 февраля 2017 года в рамках Desert X, специализированной выставки современного искусства, которую курирует художественный руководитель Невилл Уэйкфилд, MIRAGE останется на виду и после закрытия выставки до 31 октября 2017 года.

Движение было движущей силой За заселением американского Запада и длинными плоскими просторами, простирающимися к Тихому океану, сформировалась идеология, лежащая в основе этого культового воплощения американской архитектуры.Стиль калифорнийского ранчо, уникальный для Запада, был основан на идеях архитектора Фрэнка Ллойда Райта, который считал, что архитектура должна быть как в ландшафте, так и вне его. В 1920-х и 30-х годах небольшая вдохновленная группа архитекторов, работавших в Калифорнии и на Западе, создала первые загородные дома в стиле ранчо, соединив плавный подход Райта к пространству с простыми одноэтажными домами, построенными владельцами ранчо. После Второй мировой войны обтекаемая простота стиля ранчо приобрела популярность, и коммерческие строители использовали упрощенный подход к сборочной линии, чтобы создать эту эффективную форму, соответствующую быстрому росту пригородов.Дом на ранчо массового производства стал привычным зрелищем по всей стране, и его стиль наполнял американский пейзаж так же быстро, как и каждое новое здание.

MIRAGE переконфигурирован как архитектурная идея, казалось бы, типичный загородный дом, теперь лишенный повествования, его жителей, их владения. Эта минималистичная структура теперь полностью функционирует в соответствии с окружающим ее ландшафтом. Двери, окна и проемы были удалены, чтобы создать плавные отношения с окружающей средой.Отель MIRAGE расположен на стыке горного хребта Сан-Хасинто, переходящего в долину Коачелла, над далекой современной застройкой, переходящей в открытую пустыню. Когда MIRAGE притягивает пейзаж и отражает его обратно, его знакомая архитектурная форма становится устройством обрамления, визуальной эхокамерой, бесконечно отражающей мечту о природе как чистом необитаемом состоянии и стремление к ее завоеванию. Его зеркальные поверхности образуют калейдоскоп в натуральную величину, который поглощает и отражает пейзаж.Предмет и объект, внутреннее и внешнее, психологическое и физическое; каждая из этих оппозиционных сил находится в постоянном напряжении, но позволяет перемещаться и трансформироваться в постоянно меняющемся пустынном пейзаже.


Подобно объективу в масштабе человека, MIRAGE работает, чтобы кадрировать и искажать развивающийся мир за его пределами. У нас нет единого времени для просмотра этой работы, поскольку каждая вариация дает что-то новое: ночью далекие огни преломляются, создавая вселенную звезд; в безмятежный полдень небо превращается в голубые берега, разделенные кусочками облаков.Поскольку нет фиксированной перспективы или правильной интерпретации, каждый опыт этого живого произведения искусства будет уникальным.


Дуг Эйткен (род. 1968) — американский художник и кинорежиссер, чьи работы исследуют все сферы, от скульптуры, кино и инсталляций до архитектурного вмешательства. Его работы выставлялись по всему миру в таких учреждениях, как Музей американского искусства Уитни, Музей современного искусства, Венский Сецессион, Галерея Серпентина в Лондоне и Центр Жоржа Помпиду в Париже.Айткен получил Международную премию на Венецианской биеннале в 1999 году за установку электрического заземления. Он также получил премию Центра искусств Нам Джун Пайка в 2012 году и премию Smithsonian American Ingenuity в 2013 году: визуальные искусства. Он живет и работает в Лос-Анджелесе, Калифорния.

На автомобиле из Лос-Анджелеса

Следуйте по I-10 на восток до шоссе 111 (выезд на Палм-Спрингс): оставайтесь на шоссе 111 примерно 11 миль (он станет North Palm Canyon Drive). Поверните направо на West Racquet Club Road, следуйте по дороге до конца к сторожке, далее следуйте по направлению к сторожке.

Движение с востока
По трассе I-10 сверните на съезд Indian Canyon в направлении Палм-Спрингс. Направляйтесь на юг по Индийскому каньону, затем поверните направо на Ракет-Клаб-роуд и следуйте по дороге до конца к сторожке, далее по направлению к сторожке.

Из международного аэропорта Палм-Спрингс
Следуйте по East Tahquitz Canyon Way, поверните направо на North Farrell Drive, продолжайте движение по East Racquet Club Road, следуйте по дороге до конца к сторожке, далее по направлению к сторожке.

Cas9 Механизм | CRISPR / Cas9

Ключевым этапом редактирования генома организма является выборочное нацеливание на определенную последовательность ДНК. Две биологические макромолекулы, белок Cas9 и направляющая РНК, взаимодействуют с образованием комплекса, который может идентифицировать целевые последовательности с высокой селективностью.

Белок Cas9 отвечает за обнаружение и расщепление целевой ДНК как в естественных, так и в искусственных системах CRISPR / Cas. Белок Cas9 имеет шесть доменов: REC I, REC II, Bridge Helix, PAM Interacting, HNH и RuvC (рисунок 1) (Jinek et al.2014; Nishimasu et al. 2014).

Домен Rec I является самым большим и отвечает за связывание направляющей РНК. Роль домена REC II еще недостаточно изучена. Богатая аргинином мостиковая спираль имеет решающее значение для инициации активности расщепления при связывании целевой ДНК (Nishimasu et al. 2014). PAM-взаимодействующий домен придает PAM специфичность и, следовательно, отвечает за инициирование связывания с целевой ДНК (Anders et al. 2014; Jinek et al. 2014; Nishimasu et al. 2014; Sternberg et al. 2014).Домены HNH и RuvC представляют собой нуклеазные домены, которые разрезают одноцепочечную ДНК. Они очень гомологичны доменам HNH и RuvC, обнаруженным в других белках (Jinek et al. 2014; Nishimasu et al. 2014).

Рисунок 1: Белок Cas9. Белок Cas9 состоит из шести доменов: Rec I, Rec II, Bridge Helix, RuvC, HNH и взаимодействующий PAM. Домены показаны в виде схемы, кристалла и карты. (исходный рисунок) (изображение кристалла, полученное из PDB: 4CMP Jinek et al. 2014.)

Белок Cas9 остается неактивным в отсутствие направляющей РНК (Jinek et al.2014). В сконструированных системах CRISPR направляющая РНК состоит из одной цепи РНК, которая образует Т-образную форму, состоящую из одной тетрапетли и двух или трех стержневых петель (рисунок 2) (Jinek et al. 2012; Nishimasu et al. 2014). Направляющая РНК сконструирована так, чтобы иметь 5′-конец, комплементарный последовательности ДНК-мишени.

Рисунок 2: Инженерная направляющая РНК. Сконструированная направляющая РНК представляет собой одну цепь РНК. Он образует одну тетрапетлю и две или три петли стебля (показаны три). Целевой дополнительный регион показан красным.(исходный рисунок) (изображение кристалла, полученное из PDB: 4UN3 Anders et al. 2014.)

Эта искусственная направляющая РНК связывается с белком Cas9 и после связывания вызывает конформационные изменения в белке (рис. 3). Конформационное изменение превращает неактивный белок в его активную форму. Механизм конформационного изменения до конца не изучен, но Джинек и его коллеги предполагают, что стерические взаимодействия или слабое связывание между боковыми цепями белка и основаниями РНК могут вызвать изменение (Jinek et al.2014).

Рисунок 3: Активация белка Cas9 путем связывания направляющей РНК. Связывание направляющей РНК вызывает конформационное изменение белка Cas9. Конформационное изменение вызывает активацию нуклеазной активности Cas9 (Jinek et al. 2014). (исходный рисунок) (изображение кристалла, полученное из PDB: 4UN3 Anders et al.2014)

После активации белка Cas9 он стохастически ищет ДНК-мишень путем связывания с последовательностями, которые соответствуют его последовательности, примыкающей к протоспейсерному мотиву (PAM) (Sternberg et al.2014). PAM представляет собой последовательность из двух или трех оснований, расположенную в пределах одного нуклеотида ниже области, комплементарной направляющей РНК. PAM были идентифицированы во всех системах CRISPR, и специфические нуклеотиды, которые определяют PAM, специфичны для конкретной категории системы CRISPR (Mojica et al. 2009). PAM в Streptococcus pyogenes представляет собой 5′-NGG-3 ‘(Jinek et al. 2012). Когда белок Cas9 обнаруживает потенциальную последовательность-мишень с подходящим PAM, белок плавит основания непосредственно перед PAM и соединяет их с комплементарной областью на направляющей РНК (Sternberg et al.2014). Если комплементарная область и область-мишень правильно спарены, нуклеазные домены RuvC и HNH будут разрезать ДНК-мишень после третьего нуклеотидного основания выше PAM (Anders et al. 2014) (Рисунок 4).

Рисунок 4: Связывание и расщепление целевой ДНК с помощью Cas9. 1) Cas9 сканирует потенциальную целевую ДНК на наличие подходящего PAM (желтые звезды). (2) Когда белок обнаруживает PAM, комплекс белок: направляющая РНК расплавляет основания непосредственно перед PAM и соединяет их с целевой комплементарной областью на направляющей РНК (Sternberg et al.2014). (3) Если комплементарная область и область-мишень правильно спарены, домены RuvC и HNH будут разрезать целевую ДНК после третьего нуклеотидного основания выше PAM. (исходный рисунок) (изображения кристаллов: нижний левый и правый рендеринг из PDB: 4UN3 Anders et al.2014; верхний левый рендеринг из PDB: 4CMP Jinek et al. 2014)

Макрофаг LRP1 способствует вызванному диетой воспалению печени и метаболической дисфункции за счет модуляции сигналов Wnt

Abstract

Воспаление печени связано с развитием инсулинорезистентности, которая может закрепить заболевание и повысить риск метаболического синдрома и диабета.Несмотря на недавние достижения, механизмы, связывающие воспаление печени и инсулинорезистентность, все еще неясны. Белок 1, связанный с рецептором липопротеинов низкой плотности (LRP1), представляет собой большой эндоцитарный и сигнальный рецептор, который высоко экспрессируется в макрофагах, адипоцитах, гепатоцитах и ​​гладкомышечных клетках сосудов. Чтобы изучить потенциальную роль макрофагов LRP1 в воспалении печени и инсулинорезистентности, мы провели эксперименты с использованием мышей с дефицитом макрофагов LRP1 ( macLRP1 — / — ), генерируемых при нокауте рецепторов липопротеинов низкой плотности ( LDLR — / — ) и питались западной диетой. ЛПНП — / — ; macLRP1 — / — мышей набрали меньшую массу тела и улучшили толерантность к глюкозе по сравнению с мышами LDLR — / — . Печень из ЛПНП — / — ; macLRP1 — / — мышей демонстрировали более низкие уровни экспрессии генов нескольких воспалительных цитокинов, включая Ccl3, Ccl4, Ccl8, Ccr1, Ccr2, Cxcl9, и Tnf , а также сниженное фосфорилирование GSK3 α MAPK и p . белки. Более того, перитонеальные макрофаги с дефицитом LRP1 демонстрируют измененный метаболизм холестерина.Наконец, циркулирующие уровни sFRP-5, мощного противовоспалительного адипокина, который функционирует как рецептор-ловушка для Wnt5a, были повышены в LDLR — / — ; macLRP1 — / — мышей. Эксперименты по поверхностному плазмонному резонансу показали, что sFRP-5 является новым лигандом с высоким сродством к LRP1, что свидетельствует о том, что LRP1 регулирует уровни этого ингибитора передачи сигналов, опосредованной Wnt5a. В совокупности наши результаты предполагают, что экспрессия LRP1 в макрофагах способствует воспалению печени и развитию непереносимости глюкозы и инсулинорезистентности путем модуляции передачи сигналов Wnt.

1. Введение

Ожирение, дислипидемия и инсулинорезистентность являются основными причинами метаболического синдрома (МетС), который может привести к диабету 2 типа (СД2) [1]. По оценкам, 27–29 миллионов человек (примерно 9% населения) в США страдают СД2 [2], и, следовательно, значительные исследовательские усилия были направлены на выяснение патогенеза диабета и потенциальных связей между факторами риска. Одним из путей, участвующих в развитии ожирения и воспаления, является сигнальный путь Wnt [3-8], который важен для эмбрионального развития и тканевого гомеостаза [9].Большое семейство секретируемых гликопротеинов Wnt координирует множество сигнальных путей [10].

Каноническая передача сигналов Wnt сводится к накоплению и транслокации β -катенина в ядро. Активация пути происходит, когда Wnt связывается со своим рецептором frizzled (Fz) и белком 5/6, связанным с рецептором липопротеинов низкой плотности (LRP5 / 6). Основная работа Росс и др. продемонстрировали, что каноническая передача сигналов Wnt регулирует адипогенез и поддерживает преадипоциты в недифференцированном состоянии [11].Было показано, что провоспалительные цитокины, такие как фактор некроза опухоли α (TNF- α ) и интерлейкин 6 (IL-6), продуцируемые адипоцитами и / или макрофагами, способствуют канонической передаче сигналов Wnt и воспалению и ингибируют дифференцировку преадипоцитов и накопление липидов [3, 4]. В отличие от канонического пути передачи сигналов Wnt, неканонический путь передачи сигналов Wnt, также известный как β -catenin-независимый путь, менее определен. По этому пути неканонический лиганд Wnt, такой как Wnt5a, взаимодействует с Fz2 и рецепторным тирозиноподобным орфанным рецептором 2 (ROR2) для активации Rac1.Wnt5a экспрессируется в адипоцитах и ​​активируется у мышей на диете с высоким содержанием жиров [5] и способствует воспалению, связанному с ожирением [6-8]. В макрофагах Wnt5a запускает воспаление за счет активации сигнальных путей c-Jun N-терминальной киназы (JNK) [12]. Активность Wnt5a регулируется секретируемым Frizzled-связанным белком 5 (sFRP-5), внеклеточным антагонистом передачи сигналов Wnt, который функционирует как рецептор-ловушка, связывая Wnt5a и предотвращая его ассоциацию с Fz. sFRP-5 представляет собой противовоспалительный адипокин, секретируемый адипоцитами, экспрессия которого снижена на животных моделях метаболической дисфункции [5].

Недавнее исследование 450 участников когорты LIPGENE показало, что rs4759277 в гене LRP1 является верхним однонуклеотидным полиморфизмом (SNP), связанным с инсулином натощак, С-пептидом и инсулинорезистентностью [13]. Белок 1, связанный с рецептором липопротеинов низкой плотности (LRP1), является членом семейства рецепторов липопротеинов низкой плотности (LDLR) и высоко экспрессируется в адипоцитах, гепатоцитах, макрофагах, гладкомышечных клетках сосудов, фибробластах и ​​нейронах.Помимо своей роли в удалении остаточных липопротеинов из кровообращения, исследования показали, что LRP1 может связывать многочисленные неродственные лиганды с высоким сродством и может модулировать множественные пути передачи сигналов [14, 15]. Ранее мы сообщали, что макрофаг LRP1 способствует накоплению холестерина в макрофагах, что приводит к образованию пенистых клеток [16]. Настоящее исследование было предпринято для определения потенциальной роли макрофага LRP1 в воспалении, связанном с ожирением. Использование макрофаг-специфичных мышей с дефицитом LRP1 ( macLRP1 — / — ), созданных на фоне нокаута LDLR ( LDLR — / — ), которые ранее использовались в качестве модели инсулинорезистентности [17], и диета с высоким содержанием жиров, высоким содержанием холестерина и сахарозы (западная), мы раскрываем провоспалительную роль макрофага LRP1 в индуцированном диетой воспалении печени посредством модуляции пути передачи сигналов Wnt.

2. Материалы и методы

2.1. Животные

Исследования на животных были одобрены Комитетом по уходу и использованию животных Медицинской школы Университета Мэриленда. Всех мышей-самцов отнимали от груди в возрасте трех недель, поддерживали в режиме 12-часовой световой / 12-часовой темный цикл, кормили стандартной диетой для грызунов (Envigo 2018SX) или западной диетой (Envigo TD.88137) в указанном количестве. времени и давали воду ad libitum. Вес тела контролировали на протяжении всего эксперимента и записывали дважды в неделю.Окончательные данные о массе тела представлены как процент прироста массы тела, рассчитанный следующим образом:

Прирост массы тела в процентах = Окончательный вес — Начальный вес Начальный вес × 100.

(1)

Эмбриональная делеция lrp1 в макрофагах была достигнута путем скрещивания LDLR + / + или LDLR — / — мышей с мышами, экспрессирующими сайты loxP, фланкирующие оба lrp1 мышей, любезно предоставленных доктором Иоахимом Герцем из Юго-западного медицинского центра Юта).Полученное потомство, LDLR, + / + ; lrp1 flox / flox и LDLR — / — ; lrp1 flox / flox , затем скрещивали с трансгенными мышами, экспрессирующими Cre-рекомбиназу под контролем промотора лизоцима M (LysM), специфичного к миелоидному клону (любезно предоставленного доктором Ирмгард Ферстер из Боннского университета, Германия). Полученное потомство, lrp1 flox / flox ; LysM-Cre — / — ( LRP1 + / + ) и lrp1 flox / flox ; LysM-Cre +/- ( macLRP1 — / — ) на LDLR + / + или LDLR — / — фон, были использованы в экспериментальных исследованиях с LRP1 / + однопометников на соответствующем фоне LDLR , служащих в качестве контроля.

2.2. Тест на внутрибрюшинную толерантность к глюкозе (IPGTT)

Животных взвешивали, переносили в чистые клетки и голодали в течение 4-6 часов. После голодания исходные (0 минут) уровни глюкозы в крови измеряли в хвостовой вене с помощью измерителя уровня глюкозы в крови Contour USB (Bayer Healthcare 7393A) и тест-полосок для измерения уровня глюкозы в крови Contour (Bayer Healthcare 7097C). Затем животным вводили 1 мг глюкозы (исходная концентрация глюкозы 100 мг / мл; Sigma G-5767) на грамм веса тела путем внутрибрюшинной инъекции, и уровни глюкозы в крови измеряли через 5, 15, 30, 60 и 120 минут после инъекции. .Для каждого животного уровень глюкозы в крови был нанесен на график в зависимости от каждой временной точки, и площади под кривой (AUC) и выше y = 0 были определены с использованием ImageJ (NIH).

2.3. Определение инсулина в плазме

Кровь собирали из хвостовой вены во время IPGTT на исходном уровне (0 минут) и через 30 и 60 минут после инъекции глюкозы с использованием гепаринизированной капиллярной трубки для микрогематокрита (Fisher Scientific 22-362-566). Затем образцы крови переносили в микроцентрифужную пробирку и центрифугировали при 1000–2000 × g в течение 10 минут при 4 ° C, а супернатант переносили в новую микроцентрифужную пробирку и хранили при -30 ° C.Уровни инсулина в плазме определяли количественно с использованием набора ELISA для инсулина крыс / мышей (Millipore EZRMI-13K) в соответствии с инструкциями производителя. Планшет промывали четыре раза 1-кратным промывочным буфером (250, мкл, мкл / лунку на каждую промывку), и последнюю промывку удаляли отсасыванием. Буфер для анализа (10 мкл, мкл / лунку) добавляли в каждую из лунок бланка и образца, и 10 мкл мкл раствора матрицы добавляли в каждую из лунок холостого, стандартного и контрольного. Стандарты инсулина крысы / мыши (0,2, 0,5, 1, 2, 5 и 10 нг / мл), контроли качества инсулина 1 и 2 крысы / мыши и образцы плазмы добавляли в соответствующие лунки (10 мкл мкл / лунку. ) и исследовали в двух экземплярах.Обнаружение. Антитело (80, мкл, мкл / лунка) добавляли во все лунки, и планшет закрывали герметиком для планшетов и инкубировали при комнатной температуре в течение двух часов при осторожном встряхивании. Через два часа планшет промывали, как описано выше, и в каждую лунку добавляли 100– мкл 90–146 мкл раствора фермента. Планшет герметично закрывали и инкубировали при комнатной температуре в течение 30 минут при осторожном встряхивании. Через 30 минут планшет промывали шесть раз, как описано выше, и в каждую лунку добавляли 100– мкл 90–146 мкл раствора субстрата.Планшет инкубировали при комнатной температуре в защищенном от света месте в течение 15 минут при осторожном встряхивании. Добавляли стоп-раствор (100, мкл, мкл / лунку), по планшету осторожно постукивали, чтобы перемешать содержимое, и планшет считывали при 410 нм в течение 5 минут с использованием планшет-ридера Tecan GENios ™ Pro. Повторяющиеся показания для каждого бланка, стандарта и образца усредняли, и вычитали усредненную оптическую плотность (ОП) холостого опыта. Стандартная кривая была построена путем построения зависимости средней абсорбции от стандартной концентрации для каждого стандарта, а наиболее подходящая линия была определена с помощью линейной регрессии.

2.4. Определение триглицеридов в плазме

Все образцы крови собирали после голодания в течение 4–6 часов. Кровь собирали через 0 недель (до перехода на западную диету) и через 6-7 недель на западной диете путем надрезания хвоста с использованием гепаринизированной капиллярной пробирки для микрогематокрита и затем переносили в микроцентрифужную пробирку. Сбор крови в конечной точке эксперимента (после 17-18 недель западной диеты) был получен путем терминальной сердечной пункции с использованием шприца, содержащего 5 мкл л 0.5 M EDTA, pH 8,0 (Invitrogen 15575020), и образец крови затем переносили в пробирку для микроцентрифуги. Кровь, собранную путем надрезания хвоста или пункции сердца, затем центрифугировали при 1000–2000 × g в течение 10 минут при 4 ° C. Супернатант переносили в новую микроцентрифужную пробирку и хранили при -30 ° C. Уровни триглицеридов в плазме определяли количественно с использованием набора для определения триглицеридов в сыворотке (Sigma TR0100). Стандарты глицерина (0, 3,125, 6,25, 12,5, 25 и 50 мкг, г; Sigma G-7793) и образцы готовили непосредственно в 96-луночном микропланшете, разбавляли деионизированной водой и анализировали в двух экземплярах.Для всех стандартов и образцов в каждую лунку добавляли 200 мкл мкл реагента свободного глицерина, а затем 50 мкл мкл триглицеридного реагента. Микропланшет инкубировали при комнатной температуре в защищенном от света месте в течение 30 минут и измеряли оптическую плотность при 550 нм с помощью считывающего устройства для планшетов Tecan GENios ™ Pro. Повторяющиеся показания для каждого стандарта и образца усредняли, и вычитали усредненную оптическую плотность нулевого стандарта. Стандартная кривая была построена путем построения зависимости средней абсорбции от количества глицерина для каждого стандарта, а наиболее подходящая линия была определена с помощью линейной регрессии.

2,5. Количественная полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией (qRT-PCR)

Вызванные тиогликолятом перитонеальные макрофаги или печень собирали из ЛПНП — / — и ЛПНП — / — ; macLRP1 — / — мышей, получавших стандартную пищу или западную диету. Полную РНК выделяли с использованием реагента TRIzol ™ (Invitrogen 15596026) в соответствии с указаниями производителя. Затем тотальную РНК (1 мкг, г) использовали для синтеза кДНК с использованием набора RT 2 First Strand Kit (Qiagen 330401).ПЦР в реальном времени выполняли в системе определения последовательности 7900HT (Applied Biosystems) с использованием RT 2 SYBR Green ROX qPCR Mastermix (Qiagen 330520) и RT 2 Profiler ™ Mouse Lipoprotein Signaling and Cholesterol Metabolism PCR Array (Qiagen PAMM- 080Z) или RT 2 Profiler ™ Массив воспалительных цитокинов и рецепторов мышей для ПЦР (Qiagen PAMM-011Z). Количественные анализы RT-PCR генов Insr и Slc2a2 проводили с использованием TaqMan ™ Fast Advanced Master Mix (Thermo Fisher Scientific 4444963) и TaqMan® Array Mouse Fatty Liver (Thermo Fisher Scientific 4391524, RAEPRZ3).Данные относительной экспрессии генов анализировали с использованием метода 2 -ΔΔCt . Hsp90ab1 использовали в качестве домашнего гена для нормализации данных в массивах PCR передачи сигналов липопротеинов мыши и метаболизма холестерина. Hprt1 , Hsp90ab1 и Gapdh использовали в качестве генов домашнего хозяйства для нормализации данных в ПЦР-массивах воспалительных цитокинов и рецепторов мыши. Для набора TaqMan® Mouse Fatty Liver Array Hprt1 , Hsp90ab1 и Gusb использовали в качестве генов домашнего хозяйства для нормализации данных.

2.6. Иммуноблоттинг

Печень извлекали из ЛПНП — / — и ЛПНП — / — ; macLRP1 — / — мышей, получавших западную диету в течение 8 недель. Каждую печень экстрагировали 150 мкл л реагента для экстракции белков ткани T-PER ™ (Thermo Fisher Scientific) с добавлением cOmplete ™, коктейля с ингибиторами протеазы без ЭДТА (Roche) и коктейлем II с ингибиторами фосфатазы (EMD Millipore) с использованием гомогенизатор тканей (Omni International).Равные количества гомогенатов тканей разделяли на 4–12% трис-глициновом мини-протеиновом геле Novex ™ (Invitrogen) и электрофоретически переносили на нитроцеллюлозную мембрану (Thermo Fisher Scientific). Мембрану блокировали 3% блокатором для блоттинга (Bio-Rad) и инкубировали с антителом против LRP1 (R2629) [18] при 2,5 мкг / мкг / мл в течение ночи при 4 ° C. Мембрану трижды промывали 0,05% Tween 20 (Sigma-Aldrich) в трис-буферном солевом растворе (TBS-T), и связывание антител с мембраной детектировали с помощью вторичных антител IRDye® 680RD Donkey против кроличьего IgG (LI- COR Biosciences) в концентрации 1: 5000.Затем мембрану трижды промывали TBS-T и визуализировали с помощью системы инфракрасной визуализации LI-COR Odyssey. Уровни белка были количественно определены денситометрией с использованием ImageJ (NIH) и нормализованы до Hsp90.

2.7. Иммуноблот-анализ фосфопротеинов

Иммуноблот-анализ фосфопротеинов был выполнен Kinexus Bioinformatics Corporation (Ванкувер, Британская Колумбия, Канада) с использованием фосфозитного экрана Kinetworks ™ (профилирование Kinexus Bioinformatics Corporation KPSS 1.3). Ткани готовили в соответствии с инструкциями производителя.Вкратце, LDLR — / — и LDLR — / — ; macLRP1 — / — Мышей, помещенных на западную диету на две недели, умерщвляли, и все животное перфузировали DPBS. Печень рассекали, трижды промывали ледяным DPBS и гомогенизировали в 1 мл лизирующего буфера (20 мМ MOPS, 2 мМ EGTA, 5 мМ EDTA, 30 мМ NaF, 60 мМ β -глицерофосфат, 20 мМ натрия пирофосфат, 1 мМ Na 3 VO 4 , 1% Nonidet P-40, 1 мМ PMSF, 3 мМ бензамидин, 5 мкМ M пепстатин A, 10 мкМ M лейпептин, 1 мМ DTT, pH 7.2) на 250 мг печени с использованием гомогенизатора тканей (Omni International TH-01). Гомогенаты тканей обрабатывали ультразвуком (Fisher Scientific Sonic Dismembrator Model 100) четыре раза по 10 секунд каждый раз на льду и центрифугировали при

× g в течение 30 минут при 4 ° C. Супернатант переносили в новую микроцентрифужную пробирку и определяли концентрацию белка с использованием набора Pierce ™ BCA Protein Assay Kit. Затем все образцы готовили в буфере для образцов SDS-PAGE (31,25 мМ Tris-HCl (pH 6,8), 1% (

w / v ) SDS, 12.5% ( v / v ) глицерина, 0,02% ( w / v ) бромфенолового синего и 1,25% ( v / v ) β -меркаптоэтанола) при конечной концентрации 1 мг / мл, кипятили в течение четырех минут при 100 ° C и отправляли при комнатной температуре в Kinexus Bioinformatics Corporation. Фосфорилирование белков на 38 клеточных сигнальных молекулах анализировали с использованием программного обеспечения для скрининга профилей фосфопротеинов Kinexus KCPS-1.3 (Kinexus Bioinformatics Corporation). Этот анализ сочетает в себе запатентованные методологии с аналитическими методами гель-электрофореза, иммуноблоттинга и визуализации белков с помощью усиленной хемилюминесценции (ECL).

2,8. Гистологическое исследование

Печень была извлечена из ЛПНП — / — и ЛПНП — / — ; macLRP1 — / — мышей, получавших западную диету в течение 4 недель. Фиксированную формалином и залитую парафином печень анализировали на 5 срезах размером мкм и мкм. Срезы каждой печени подвергали окрашиванию гематоксилином и эозином (H&E) для анализа содержания жира в гепатоцитах.

2.9. Стимуляция перитонеальных макрофагов липополисахаридом (ЛПС)

Перитонеальные макрофаги собирали из ЛПНП — / — и ЛПНП — / — ; macLRP1 — / — мышей, получавших стандартную диету с перитонеальным лаважем, через пять дней после внутрибрюшинной инъекции 1 мл бульона Брюера, модифицированного тиогликолятом (3.8% w / v ; BD Biosciences 211716). Макрофаги объединяли в соответствии с генотипом, один раз промывали фосфатно-солевым буфером Дульбекко (DPBS; Corning 21-031-CV) и обрабатывали лизирующим буфером хлорид аммония-кали (ACK) в течение 8 минут при комнатной температуре. Лизирующий буфер ACK разбавляли модификацией Дульбекко среды Игла (DMEM; Corning 10-013-CV) с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки (FBS; Sigma F-4135), и клетки центрифугировали при 1200 об / мин в течение 7 минут.Макрофаги ресуспендировали в DMEM, 10% FBS, 1X пенициллин-стрептомицин (P / S; Corning 30-002-CI) (универсальная культуральная среда), высевали из расчета 2 × 10 6 клеток на 60-миллиметровую чашку для культуры ткани и поддерживали при 37 ° C, 5% CO 2 во влажной атмосфере. На следующий день неприлипающие клетки удаляли, а прикрепленные клетки трижды промывали DPBS и инкубировали в универсальной культуральной среде. Через 16-18 часов клетки промывали один раз DPBS и голодали по сыворотке в течение 16-18 часов.Затем клетки промывали DMEM, 1X P / S и обрабатывали 50 нг / мл липополисахарида (LPS; Sigma L-2654) или без него в DMEM, 1X P / S в течение 24 часов. Через 24 часа кондиционированные среды собирали и центрифугировали на максимальной скорости в микроцентрифужной пробирке в течение 5 минут, а супернатант переносили в новую микроцентрифужную пробирку и замораживали при -30 ° C. Клетки промывали один раз ледяным DPBS и лизировали непосредственно на чашке для культуры ткани с помощью 200 мкл л / чашку реагента для экстракции белка из ткани T-PER ™ (Thermo Fisher Scientific 78510) с добавлением cOmplete ™, ингибитора протеазы, не содержащего ЭДТА. Коктейль (Roche 11873580001) и набор коктейлей с ингибитором фосфатазы II (EMD Millipore 524625).Лизаты целых клеток переносили в микроцентрифужную пробирку и центрифугировали с максимальной скоростью в микроцентрифужной пробирке в течение 5 минут, а супернатант переносили в новую микроцентрифужную пробирку и замораживали при -30 ° C. Концентрацию лизатного белка определяли с использованием набора Pierce ™ BCA Protein Assay Kit (Thermo Fisher Scientific 23225).

2.10. Иммуноферментный анализ IL-6 (ELISA)

IL-6 в образцах среды, кондиционированных перитонеальными макрофагами, определяли количественно с использованием набора LEGEND MAX Mouse IL-6 ELISA (BioLegend 431307) в соответствии с инструкциями производителя.Стандарт был восстановлен в соответствии с инструкциями, и были приготовлены разбавленные стандарты (0, 3,9, 7,8, 15,6, 31,3, 62,5, 125 и 250 пг / мл) и образцы (коэффициент разведения 1, 50, 100 или 200). Планшет промывали пять раз 1-кратным промывочным буфером (250, мкл, мкл / лунку на каждую промывку), и последнюю промывку удаляли отсасыванием. Буфер для анализа A (50 мкл, мкл / лунка) добавляли во все лунки, и 50 мкл мкл разбавленного стандарта или образца добавляли в каждую лунку и анализировали в двух экземплярах. Планшет закрывали герметиком для планшетов и инкубировали при комнатной температуре в течение двух часов при осторожном встряхивании.Через два часа планшет промывали, как описано выше, и в каждую лунку добавляли 100– мкл 90–146 мкл мышиного антитела для обнаружения IL-6. Планшет герметично закрывали и инкубировали при комнатной температуре в течение одного часа при осторожном встряхивании. Через один час планшет промывали, как описано выше, и в каждую лунку добавляли 100 мкл мкл раствора авидин-HRP A. Планшет герметично закрывали и инкубировали при комнатной температуре в течение 30 минут при осторожном встряхивании. Через 30 минут планшет промывали шесть раз, как описано выше, и добавляли 100 мкл мкл раствора субстрата E в каждую лунку.Планшет инкубировали при комнатной температуре в защищенном от света месте в течение 15 минут. Добавляли стоп-раствор (100, мкл, мкл / лунку); планшет осторожно постукивали для перемешивания содержимого и считывали при 410 нм в течение 30 минут с использованием планшет-ридера Tecan GENios ™ Pro. Повторяющиеся показания для каждого стандарта и образца усредняли, и вычитали усредненную оптическую плотность нулевого стандарта. Стандартная кривая была построена путем построения зависимости средней абсорбции от стандартной концентрации для каждого стандарта, а наиболее подходящая линия была определена с помощью линейной регрессии.

2.11. sFRP-5 ELISA

Образцы плазмы собирали, как описано выше, и sFRP-5 в образцах количественно определяли с использованием набора для ELISA Mouse sFRP-5 (Cloud-Clone Corp. SEC842Mu) в соответствии с инструкциями производителя. Стандарт был восстановлен в соответствии с инструкциями, и были приготовлены разбавленные стандарты (0, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 8 и 16 нг / мл) и образцы (коэффициент разведения 10, 20 или 50). Стандарт или образец добавляли в каждую лунку (100, мкл, мкл / лунку) и анализировали в двух экземплярах, и планшет закрывали герметиком для планшетов и инкубировали при 37 ° C в течение двух часов.Через два часа жидкость отсасывали из каждой лунки, в каждую лунку добавляли 100– мкл 90–146 мкл разбавленного реагента для обнаружения А, и планшет герметично закрывали и инкубировали при 37 ° C в течение одного часа. Через один час планшет промывали четыре раза 1-кратным промывочным буфером (250, мкл, мкл / лунку на каждую промывку). Последнюю промывку аспирировали, в каждую лунку добавляли 100 мкл мкл разбавленного реагента B для обнаружения, и планшет герметично закрывали и инкубировали при 37 ° C в течение 30 минут. Планшет промывали, как описано выше, заключительную промывку аспирировали и в каждую лунку добавляли 90 мкл мкл раствора субстрата TMB.Планшет закрывали, защищали от света и инкубировали при 37 ° C в течение 15-25 минут. Добавляли стоп-раствор (50 мкл, мкл / лунку), по планшету осторожно постукивали, чтобы перемешать содержимое, и планшет считывали при 410 нм с использованием планшет-ридера Tecan GENios ™ Pro. Повторяющиеся показания для каждого стандарта и образца усредняли, и вычитали усредненную оптическую плотность нулевого стандарта. Стандартная кривая была построена путем построения зависимости средней абсорбции от стандартной концентрации для каждого стандарта, а наиболее подходящая линия была определена с помощью линейной регрессии.

2.12. Поверхностный плазмонный резонанс (SPR)

Связывание sFRP-5 (R&D Systems 6266-SF-050) с LRP1 оценивали с помощью оптической биосенсорной системы Biacore 3000 (GE Healthcare Life Sciences). Полноразмерный LRP1, очищенный из плаценты, как описано [19], был связан с сенсорным чипом CM5 (GE Healthcare Life Sciences BR-1003-99) с использованием набора для связывания аминов (GE Healthcare Life Sciences BR-1000-50). Отдельная проточная ячейка сенсорного чипа CM5 была активирована и заблокирована 1 М этаноламином без LRP1 и служила контрольной поверхностью.Различные концентрации лиганда в буфере HBS-P (0,01 M HEPES, pH 7,4, 0,15 M NaCl, 0,005% ( v / v ) Surfactant P20; GE Healthcare Life Sciences BR100368) с добавлением 1 мМ CaCl 2 были протекала по поверхности сенсорного чипа, связанного с LRP1, со скоростью 20 мкм л / мин при 25 ° C. Чтобы учесть изменения показателя преломления, зависящие от проточной кюветы, сенсограммы буфера HBS-P, содержащего эквивалентные количества буфера, в котором был приготовлен белок, вычитали из сенсограмм для каждой из соответствующих концентраций лиганда.Между прогонами образцов поверхности сенсорного чипа регенерировали с помощью 15-секундных инъекций 100 мМ фосфорной кислоты при скорости потока 100 мк л / мин. Данные были проанализированы путем аппроксимации наблюдаемой константы скорости псевдопервого порядка ( k obs ) и добавление неспецифического компонента для определения максимальных единиц ответа при равновесии ( R экв ). Константа скорости равновесной диссоциации ( K D ) был затем определен путем нанесения на график R eq значений в зависимости от концентрации лиганда и подгонка данных к одному классу сайтов с использованием анализа нелинейной регрессии (GraphPad Prism 7.0 программное обеспечение).

2.13. Статистический анализ

Все результаты представлены как средние значения ± стандартная ошибка среднего. Данные были проанализированы на предмет значимости с использованием теста Стьюдента t или двухфакторного дисперсионного анализа с последующими посттестами Бонферрони. Значение p <0,05 было установлено в качестве порога значимости.

3. Результаты

3.1. Генетическая делеция LRP1 в макрофагах улучшает толерантность к глюкозе и снижает прибавку в весе у западных диет

LDLR — / — Мышей

Чтобы изучить вклад макрофагов LRP1 в метаболизм всего тела, LDLR — / — и ЛПНП — / — ; macLRP1 — / — мышей помещали на западную диету на восемь недель, а вес тела измеряли дважды в неделю. ЛПНП — / — и ЛПНП — / — ; macLRP1 — / — мышей продемонстрировали аналогичную тенденцию к увеличению прироста массы тела; однако LDLR — / — ; У мышей macLRP1 — / — наблюдался значительно меньший прирост массы тела в процентах после восьми недель западного питания (). Затем мы провели внутрибрюшинный тест на толерантность к глюкозе (IPGTT). Начальные уровни глюкозы в крови натощак были одинаковыми для ЛПНП — / — и ЛПНП — / — ; macLRP1 — / — мышей ().Однако ЛПНП — / — ; Мыши macLRP1 — / — показали улучшенную толерантность к глюкозе с более низкой средней кривой глюкозы () и значительно более низкой средней площадью под кривой (AUC) () по сравнению с мышами LDLR — / — . Кроме того, LDLR — / — ; У мышей macLRP1 — / — уровень глюкозы в крови был значительно ниже через 5 и 15 минут (). Уровни инсулина в плазме во время IPGTT имели тенденцию к снижению: LDLR — / — ; macLRP1 — / — мышей; однако различия не были значительными ().

Снижение набора массы тела и улучшение толерантности к глюкозе для ЛПНП — / — ; macLRP1 — / — мышей. ЛПНП — / — и ЛПНП — / — ; macLRP1 — / — мышей содержали на западной диете в течение 8 недель перед проведением теста на внутрибрюшинную толерантность к глюкозе (IPGTT). (а) Процент увеличения массы тела мышей через 8 недель ( ЛПНП — / — n = 14, ЛПНП — / — ; macLRP1 — / — n = 11).Кривая IPGTT (введение глюкозы 1 мг / г), отображающая емкость клиренса глюкозы (b) и площадь под кривой (AUC, c) ЛПНП — / — ( n = 14) и ЛПНП — / — ; macLRP1 — / — ( n = 13) мышей. (d) Уровни инсулина в плазме во время IPGTT ( LDLR — / — n = 8 и LDLR — / — ; macLRP1 — / — n = 9). Данные представляют собой среднее значение ± SEM результатов. п <0.05.

Интересно, что влияние дефицита LRP1 в макрофагах наблюдалось только у мышей на фоне LDLR — / — . Когда эксперименты с массой тела и метаболизмом глюкозы были повторены с macLRP1 — / — мышей на фоне ЛПНП дикого типа ( ЛПНП + / + ), различий между ЛПНП + / + не наблюдалось. и ЛПНП + / + ; macLRP1 — / — мышей по массе тела, уровням глюкозы натощак, толерантности к глюкозе или уровням триглицеридов в плазме, даже если мышей поддерживали на западной диете в течение 17-18 недель, чтобы гарантировать, что любые незначительные различия, связанные с дефицитом LRP1 в будут наблюдаться макрофаги (Рисунок S1).

3.2. Воспаление печени ослаблено

ЛПНП — / — ; macLRP1 — / — Мышей, зараженных западной диетой

Чтобы дополнительно охарактеризовать эффекты делеции LRP1 в макрофагах, мы исследовали уровни экспрессии нескольких генов, участвующих в опосредовании воспалительной реакции в печени ЛПНП — / — и ЛПНП — / — ; macLRP1 — / — мышей, получавших западную диету в течение двух недель. Количественный анализ печени с помощью ОТ-ПЦР с использованием ПЦР-массива воспалительных цитокинов и рецепторов мышей (Qiagen) выявил семь генов, которые были значительно подавлены в LDLR — / — ; macLRP1 — / — мышей: Ccl3 , Ccl4 , Ccl8 , Ccr1 , Ccr2 , Cxcl9 и Tnf ().Мы также проанализировали уровни экспрессии генов рецептора инсулина ( Insr ) и Glut2 ( Slc2a2 ), поскольку Ding et al. показали, что делеция LRP1 в печени приводит к заметному ослаблению этих белков [20]. Количественный анализ ОТ-ПЦР не показал изменений в содержании этих генов в печени ЛПНП — / — и ЛПНП — / — ; macLRP1 — / — мышей, получавших западную диету в течение двух недель ().

Экспрессия LRP1 увеличивала вызванное диетой воспаление печени у мышей.а) ЛПНП — / — и ЛПНП — / — ; macLRP1 — / — мышей содержали на западной диете в течение 2 недель. Печень обрабатывали и анализировали на наличие воспалительных цитокинов Ccl3, Ccl4, Ccl8, Ccr1, Ccr2, Cxcl9, и Tnf с помощью количественной ОТ-ПЦР ( n = 3). (b) Уровни экспрессии рецептора инсулина и Glut2 ( Insr и Slc2a2 соответственно) анализировали на изобилие с помощью количественной ОТ-ПЦР ( n = 3).Данные представляют собой среднее значение ± SEM результатов. p <0,05, ∗∗ p <0,01.

3.3. Регуляция сигнальных путей метаболизма глюкозы в печени в

LDLR — / — ; macLRP1 — / — Мышей, зараженных западной диетой

В дополнение к анализу экспрессии генов, связанных с воспалением, мы также исследовали активацию нескольких сигнальных путей на уровне белка в печени ЛПНП — / — и ЛПНП — / — ; macLRP1 — / — мышей, получавших западную диету в течение двух недель.Мышей помещали на западную диету на две недели, а печень обрабатывали и анализировали с помощью иммуноблоттинга для идентификации дифференциально фосфорилированных белков (таблица S1). Киназа гликогенсинтазы 3 (GSK3) представляет собой многофункциональную киназу, которая участвует в метаболизме глюкозы и других различных физиологических путях. GSK3 имеет две изоформы ( α и β ), которые обладают обширной гомологией последовательностей и имеют сходные, но не повторяющиеся функции [21]. Активность этой конститутивно активной серин-треонинкиназы регулируется фосфорилированием определенных остатков.GSK3 α ингибируется фосфорилированием по серину-21 (S21) протеинкиназой B [22], а GSK3 β активируется фосфорилированием по тирозину-216 (Y216) [23]. Недавно сообщалось, что активность GSK3 β регулируется фосфорилированием C-концевого остатка треонина-390 с помощью p38 MAPK [24]. Анализ фосфопротеинов выявил два белка, которые были значительно менее фосфорилированы в печени: LDLR — / — ; macLRP1 — / — мышей, GSK3 α (S21) и p38 MAPK (T180, Y182) и без изменений в GSK3 β (Y216) ().Этот результат предполагает уникальную роль LRP1 в регуляции функции GSK3 и, таким образом, в модуляции метаболизма глюкозы. Вместе эти результаты предполагают, что печень из LDLR — / — ; macLRP1 — / — мышей, зараженных западной диетой, обладают меньшим провоспалительным действием и подтверждают наши данные о перитонеальных макрофагах.

Регуляция сигнальных путей метаболизма глюкозы в печени LDLR — / — ; macLRP1 — / — мышей, зараженных западной диетой. ЛПНП — / — и ЛПНП — / — ; macLRP1 — / — мышей содержали на западной диете в течение 2 недель. Печень обрабатывали и анализировали на уровни фосфопротеинов с помощью иммуноблоттинга Kinexus (a, n = 2). Слева указаны маркеры молекулярной массы. Полосы в кружке относятся к GSK3 α (1), GSK3 β (2) и p38 MAPK (3). (b) Количественную оценку иммуноблотов проводили с использованием программного обеспечения для скрининга профилей фосфопротеинов Kinexus KCPS-1.3.(c) содержание жира в печени было визуализировано в ЛПНП, — / — , и ЛПНП, — / — ; macLRP1 — / — мышей, содержавшихся на западной диете в течение 4 недель путем окрашивания гематоксилином и эозином (H&E). Репрезентативные микрофотографии (20x) срезов печени из ЛПНП — / — ( n = 8) и ЛПНП — / — ; macLRP1 — / — ( n = 9) мышей. (d) Печеночные экспрессии LRP1 в LDLR — / — и LDLR — / — ; macLRP1 — / — мышей ( n = 4), которых содержали на западной диете в течение 8 недель.Печень обрабатывали и анализировали на уровни LRP1 с помощью иммуноблоттинга. (e) Результаты иммуноблота в (d) количественно оценивали денситометрией с использованием программного обеспечения NIH ImageJ и нормализовали до Hsp90 ( p = 0,25). Данные представляют собой среднее значение ± SEM результатов. p <0,05.

Мы продолжили наше исследование влияния дефицита LRP1 макрофагов на содержание жира в печени путем анализа в печени ЛПНП — / — и ЛПНП — / — ; macLRP1 — / — мышей, получавших западную диету в течение четырех недель.Окрашивание срезов печени гематоксилином и эозином (H&E) не показало разницы в накоплении жира в этих печени (). На экспрессию LRP1 в печени не влияет делеция LRP1 макрофагов, как показывает иммуноблоттинг LRP1 экстрактов печени из LDLR — / — и LDLR — / — ; macLRP1 — / — мышей, получавших западную диету в течение восьми недель (Фигуры и). Этот результат подтверждает неизменный печеночный клиренс активированного α . 2 -макроглобулин, классический лиганд LRP1, который, как известно, захватывается гепатоцитами [25], LRP1 в LDLR — / — ; macLRP1 — / — мышей, как сообщалось ранее [16].

3.4. LRP1-дефицитные перитонеальные макрофаги менее провоспалительны и могут модулировать метаболизм холестерина

Центральная роль липопротеинов в системных воспалительных состояниях, таких как атеросклероз, хорошо известна. Мы решили продолжить изучение воспалительной реакции макрофагов, выделенных из ЛПНП — / — и ЛПНП — / — ; macLRP1 — / — мышей, получавших стандартную пищу. Вызванные тиогликолатом перитонеальные макрофаги выделяли и обрабатывали PBS (контроль) или 50 нг / мл LPS в течение 24 часов, и измеряли уровни IL-6 в кондиционированной среде.LPS-индуцированная продукция IL-6 в LDLR — / — ; macLRP1 — / — мышей было ослаблено по сравнению с LDLR — / — мышей (). Хотя уровни IL-6 не достигли значимости, этот результат позволяет предположить, что LRP1-дефицитные макрофаги могут быть менее провоспалительными при выделении от необработанных наивных мышей. Чтобы определить потенциальную роль макрофага LRP1 в метаболизме липопротеинов и выявить любые различия при введении западной диеты, мы исследовали уровни экспрессии нескольких генов, участвующих в передаче сигналов липопротеинов и метаболизме холестерина.Количественный анализ ОТ-ПЦР перитонеальных макрофагов, выделенных из ЛПНП — / — и ЛПНП — / — ; macLRP1 — / — мышей, получавших стандартную пищу или западную диету в течение двух недель, выявили три гена, которые регулировались дифференцированно: Fdps , Pcsk9 и Soat1 (). Уровни матричной РНК для фарнезилдифосфатсинтетазы ( Fdps ) (левая панель), ключевого фермента, участвующего в биосинтезе изопреноидов и катализирующего образование нескольких метаболических предшественников, значительно снижены в LDLR — / — ; macLRP1 — / — перитонеальных макрофагов, выделенных от мышей, получавших кормовую диету.Однако при переходе на западную диету уровни мРНК Fdps значительно снизились в перитонеальных макрофагах — / — перитонеальных макрофагов по сравнению с таковыми на диете, в то время как уровни остались неизменными в LDLR — / — ; macLRP1 — / — перитонеальные макрофаги независимо от диеты. Уровни матричной РНК для пропротеинконвертазы субтилизин / кексин типа 9 ( Pcsk9 ) (центральная панель), медиатора плазменного гомеостаза холестерина и лиганда для членов семейства LDLR, значительно повышены в LDLR — / — ; macLRP1 — / — перитонеальных макрофагов, выделенных от мышей, получавших кормовую диету.При переходе на западную диету уровни мРНК Pcsk 9 значительно снизились в LDLR — / — ; macLRP1 — / — перитонеальных макрофагов по сравнению с макрофагами на диете, в то время как уровни оставались неизменными в ЛПНП — / — перитонеальных макрофагах независимо от диеты. Результаты, аналогичные Pcsk9 , также наблюдались для уровней мРНК стерол-O-ацилтрансферазы 1 ( Soat1 ) (правая панель), фермента, локализованного в ER и катализирующего образование сложных эфиров холестерина.В совокупности эти результаты предполагают, что циркулирующие LRP1-дефицитные макрофаги на фоне LDLR — / — обладают меньшим провоспалительным действием и могут влиять на метаболизм холестерина.

LRP1 модулирует воспалительную реакцию и метаболизм холестерина в макрофагах. (а) Вызванные тиогликолятом перитонеальные макрофаги, выделенные из ЛПНП — / — и ЛПНП — / — ; macLRP1 — / — Мышей заражали PBS (контроль) или 50 нг / мл LPS в течение 24 часов.LPS-индуцированную продукцию IL-6 измеряли в кондиционированной среде ( n = 3). (б) ЛПНП — / — и ЛПНП — / — ; macLRP1 — / — Мышей содержали на стандартной или западной диете в течение 2 недель, и РНК выделяли из перитонеальных макрофагов, вызванных тиогликолятом. МРНК Fdps , Pcsk9, и Soat1 анализировали с помощью количественного анализа RT-PCR (chow n = 2; Western n = 3).Данные представляют собой среднее значение ± SEM результатов. Двусторонний дисперсионный анализ ANOVA был использован для оценки статистической значимости различий между группами и эффекта западной диеты. p <0,05, ∗∗ p <0,01, ∗∗∗∗ p <0,0001.

3.5. LRP1 непосредственно связывается с sFRP-5 и может модулировать передачу сигналов Wnt

Было показано, что неканоническая передача сигналов Wnt способствует ожирению, инсулинорезистентности и воспалению. Члены семейства секретируемых Frizzled-связанных белков (sFRP) конкурируют с трансмембранными рецепторами Frizzled за лиганды Wnt и могут модулировать путь передачи сигналов Wnt.Предыдущие исследования, проведенные Ouchi et al. показали, что секретируемый белок 5 (sFRP-5) является противовоспалительным адипокином, который может опосредовать ожирение и метаболический синдром [5]. Изучить, является ли sFRP-5 потенциальным молекулярным механизмом, лежащим в основе улучшенной толерантности к глюкозе, сниженного набора массы тела и менее провоспалительного фенотипа, наблюдаемого в LDLR — / — ; macLRP1 — / — мышей, уровни sFRP-5 в крови были измерены в LDLR — / — и LDLR — / — ; macLRP1 — / — мышей.До перехода на западную диету ЛПНП — / — ; macLRP1 — / — мышей имели значительно более высокие уровни базового sFRP-5 в плазме по сравнению с LDLR — / — мышей (, 0 недель). После помещения на западную диету на восемь недель ЛПНП — / — ; macLRP1 — / — мышей показали значительное снижение уровней sFRP-5, достигнув уровней, сравнимых с уровнями, измеренными у LDLR — / — мышей (, 8 недель). Напротив, уровни циркулирующих sFRP-5 у мышей LDLR, — / — оставались неизменными при введении западной диеты.

LRP1 напрямую связывается с sFRP-5 и может модулировать передачу сигналов Wnt. (a) Уровни sFRP-5 в плазме LDLR — / — ( n = 13) и LDLR — / — ; macLRP1 — / — ( n = 11) мышей до и после содержания на западной диете в течение 8 недель. (b) Связывание возрастающих концентраций sFRP-5 (1,6, 3,1, 6,3, 12,5, 25, 50 и 100 нмоль / л) с LRP1, иммобилизованным на поверхности сенсорного чипа Biacore. (в) R Значения eq , определенные путем подгонки данных ассоциации в (b) к процессу псевдопервого порядка с неспецифическим компонентом, были перенесены на другую графику.концентрации sFRP-5 и K D значение 32 ± 3 нМ определяли с помощью нелинейного регрессионного анализа. Данные представляют собой среднее значение ± SEM трех независимых экспериментов. p <0,05.

Два члена семейства LRP, LRP5 и LRP6, являются корецепторами для трансмембранного рецептора лиганда Wnt Frizzled и могут модулировать путь передачи сигнала Wnt / β -катенин. Из-за более высоких циркулирующих уровней sFRP-5, наблюдаемых в LDLR — / — ; macLRP1 — / — мышей на исходном уровне, эксперименты по связыванию были выполнены, чтобы проверить, взаимодействует ли sFRP-5 напрямую с LRP1.Эксперименты по поверхностному плазмонному резонансу (SPR) показали, что sFRP-5 напрямую связывается с очищенным LRP1 в зависимости от концентрации (). Данные были подогнаны под процесс псевдопервого порядка с добавлением неспецифического компонента для определения максимальных единиц отклика при равновесии ( R экв ). R Затем были построены графики зависимости экв. значений от концентрации для определения K D значение 32 ± 3 нМ (). Эти результаты показывают, что LRP1 непосредственно связывается с sFRP-5, тем самым влияя на активацию неканонического пути передачи сигналов Wnt.

4. Обсуждение

Как член семейства рецепторов LDL, основная эндоцитарная функция LRP1 включает удаление остатков хиломикронов из кровотока. Недавние исследования выявили важную роль LRP1 в модуляции передачи сигналов инсулина и гомеостаза глюкозы во многих тканях и предполагают сложное взаимодействие с его ролью в метаболизме липопротеинов [26]. В текущем исследовании мы использовали мышей с дефицитом ЛПНП, которых придерживались диеты с высоким содержанием жиров, холестерина и сахарозы (западная), модель на мышах, которая хорошо подходит для исследования воспаления печени при неалкогольной жировой болезни печени [27].Результаты наших исследований показывают, что экспрессия LRP1 в макрофагах способствует воспалению печени посредством процесса, который, по-видимому, включает регуляцию пути передачи сигналов Wnt. Сначала мы демонстрируем, что LDLR — / — ; У мышей macLRP1 — / — улучшилась толерантность к глюкозе и чувствительность к инсулину, и они набрали меньшую массу тела при питании по западной диете. Во-вторых, в сочетании с улучшенным метаболизмом глюкозы как перитонеальные макрофаги, так и печень изолированы от LDLR — / — ; macLRP1 — / — мышей продуцировали более низкие уровни провоспалительных цитокинов по сравнению с LDLR — / — однопометников.В-третьих, мы обнаружили, что циркулирующие уровни sFRP-5 повышены в LDLR — / — ; macLRP1 — / — мышей, и в-четвертых, мы использовали эксперименты SPR для подтверждения связывания с высокой аффинностью sFRP-5 с LRP1, обнаружив, что sFRP-5 является новым лигандом LRP1. sFRP-5 представляет собой мощную противовоспалительную молекулу, которая модулирует метаболическую дисфункцию при ожирении, связывая и секвестрируя Wnt5a, предотвращая его способность активировать сигнальный путь Wnt [11], а регулирование его уровней с помощью LRP1 обеспечивает вероятный механизм эффектов, которые мы наблюдаем. отметка в LDLR — / — ; macLRP1 — / — мышей.Интересно, что для демонстрации эффектов macLRP1 — / — на метаболизм глюкозы требовался фон ЛПНП, — / — , поскольку наши результаты не показали различий в массе тела, уровне глюкозы натощак, толерантности к глюкозе или триглицеридах плазмы. уровни, даже если мышей поддерживали на западной диете в течение 17–18 недель на фоне ЛПНП + / + . Вероятно, это происходит из-за резкого (> 10-кратного) повышения уровня холестерина и триглицеридов в плазме у мышей, лишенных рецептора ЛПНП, при кормлении западной диетой [28], который дополнительно увеличивается в LDLR — / — ; macLRP1 — / — мышей [16].Напротив, уровни холестерина и триглицеридов в плазме изменяются только примерно в 2 раза у мышей LDLR + / + на западной диете [28].

На основании наших результатов мы предлагаем модель (правая панель), в которой LRP1 модулирует путь передачи сигналов Wnt, напрямую связываясь с sFRP-5 и эффективно удаляя эту молекулу, опосредуя ее клеточное поглощение и последующую деградацию. В результате удаления этого ингибитора лиганды Wnt могут связывать Fz и корецептор LRP5 / 6, что приводит к активации пути передачи сигнала Wnt.Благодаря неизвестным механизмам наши данные также показали, что экспрессия LRP1 приводит к увеличению активации p38 MAPK, что может привести к инактивации GSK3 и накоплению β -катенина (правая панель). Напротив, в отсутствие LRP1 (левая панель) sFRP-5 функционирует как рецептор-ловушка и секвестрирует лиганды Wnt и тем самым ослабляет передачу сигналов Wnt, что приводит к менее провоспалительному состоянию.

Предполагаемая роль макрофага LRP1 в воспалительных состояниях, вызванных диетой.В провоспалительных условиях макрофаг LRP1 секвестрирует sFRP-5, чтобы модулировать путь передачи сигнала Wnt и его нижестоящие эффекторы. LRP1 опосредует активацию p38 MAPK, которая, в свою очередь, инактивирует GSK3. Это вызывает нарушение толерантности к глюкозе, нарушение регуляции метаболизма гликогена и резистентность к инсулину. В целом у мышей наблюдается увеличение массы тела с нарушением метаболической функции. APC: аденоматозный полипоз кишечной палочки; Двл: растрепанный; Fz: вьющиеся; sFRP-5: секретируемый белок 5, родственный Frizzled; GSK3: киназа гликогенсинтазы 3; LRP1: белок 1, связанный с рецептором липопротеинов; LRP5 / 6: белок 5/6, связанный с рецептором липопротеинов; p38 MAPK: митоген-активированная протеинкиназа p38; TCF / LEF: фактор Т-лимфоцитов / фактор увеличения лимфоида; Wnt: сайт интеграции, посвященный бескрылым.

Каноническая передача сигналов Wnt строго регулирует адипогенез, поддерживая преадипоциты в недифференцированном состоянии [11]. Независимо от его роли в адипогенезе, недавние достижения продемонстрировали, что передача сигналов Wnt может оказывать как воспалительные, так и противовоспалительные эффекты, частично за счет модуляции пути NF- κ B [29]. Однако воспалительная роль белков Wnt широко варьируется в зависимости от тканевых и патофизиологических контекстов. Работа Gustafson и Smith показала, что как IL-6, так и TNF- α поддерживают каноническую передачу сигналов Wnt и ингибируют дифференцировку преадипоцитов и накопление липидов [3].Кроме того, IL-6 и TNF- α способствовали воспалительному фенотипу адипоцитов, обеспечивая связь между воспалением слабой степени, ожирением, инсулинорезистентностью и T2D. Неканоническая передача сигналов Wnt, в частности активация с помощью Wnt5a, также, как было показано, способствует экспрессии провоспалительных цитокинов в макрофагах, что приводит к воспалению жировой ткани и нарушению гомеостаза глюкозы [7, 8]. Внеклеточные антагонисты сигнального пути Wnt предотвращают взаимодействия лиганд-рецептор и включают членов семейства Dickkopf (Dkk), фактор ингибирования Wnt-1 (WIF-1), Cerberus (CER1) и члены семейства секретируемых frizzled-related белков (sFRP) [30 ].sFRP связываются непосредственно с Wnt, и исследования Ouchi et al. показали, что sFRP-5 представляет собой противовоспалительный адипокин, который модулирует реакцию макрофагов жировой ткани, толерантность к глюкозе и стеатоз печени [5]. Дополнительные исследования на людях подтвердили, что более низкие уровни sFRP-5 коррелируют с ожирением, нарушением толерантности к глюкозе, инсулинорезистентностью и СД2 [31, 32]. В совокупности наши результаты подтверждают, что LRP1 может модулировать как канонические, так и неканонические пути передачи сигналов Wnt, и необходимы дальнейшие исследования для определения участия LRP1 в регуляции уровней и функции специфических белков Wnt.

Наши результаты, по-видимому, противоречат существующей литературе, демонстрирующей атеропротекторную роль макрофага LRP1 и его способность оказывать противовоспалительное действие [33–41]. Существует несколько правдоподобных объяснений наблюдаемых расхождений между текущим исследованием и существующей литературой. Во-первых, многие исследования, в которых сообщалось о противовоспалительном эффекте макрофага LRP1, проводились на мышах на инбредном фоне C57BL / 6. Напротив, наши эксперименты проводились на мышах на смешанном фоне C57BL / 6 × 129S6 / SvEv с использованием контрольных братьев и сестер.В многочисленных исследованиях сообщалось о различиях воспалительных и метаболических реакций на диету с высоким содержанием жиров, которые зависели от генетического фона мышей [42–45], и также вероятно, что большая вариабельность воспалительной и метаболической реакции свойственна мышам с смешанный фон по сравнению с инбредными мышами. Во-вторых, в нескольких исследованиях в существующей литературе используется трансплантация костного мозга (BMT) для трансплантации донорского костного мозга macLRP1 — / — облученным мышам-реципиентам LDLR — / — .Хотя этот метод хорошо зарекомендовал себя для изучения гемопоэтических клеток в развитии атеросклероза, известные физиологические эффекты облучения, такие как отсутствие прибавки в весе и желудочно-кишечный синдром, делают этот метод менее подходящим для изучения ожирения и СД2 [46]. Также вероятно, что ответ макрофагов BMT в микросреде атеросклеротического поражения будет отличаться от ответа резидентных макрофагов в микросреде печени или жировой ткани. Наконец, модуляторы воспаления, такие как ремоделирование сосудов, вызванное перевязкой сонной артерии [47] и состав рациона грызунов [48], будут влиять на ответ макрофагов.В нашем исследовании используется хорошо задокументированная генетически модифицированная линия мышей для изучения влияния типичной западной диеты человека на реакцию макрофагов. Эта модель позволяет нам исследовать циркулирующие и тканеспецифичные резидентные макрофаги в их микроокружении без влияния факторов, которые могут изменить иммунный ответ.

Еще один момент, который следует учитывать, — это новая двойная роль LRP1 в возникновении и регрессе атеросклероза, о которой недавно сообщили Mueller et al. [49]. В этом исследовании авторы продемонстрировали, что макрофаги с дефицитом LRP1 напрямую способствуют обратному транспорту холестерина и переходу к противовоспалительному фенотипу, достигая регрессии атеросклероза, вызванного западной диетой.Это элегантное исследование подчеркивает сложную роль LRP1 как в развитии, так и в регрессе атеросклероза. В этом отношении измененные экспрессии Pcsk9 и Fdps в LRP1-дефицитных перитонеальных макрофагах в нашем исследовании указывают на более провоспалительную роль LRP1 и подтверждают двойную и противоположную роль LRP1 в модуляции воспалительного ответа. Это может объяснить ослабление воспаления печени в LDLR — / — ; macLRP1 — / — мышей, зараженных западной диетой, наблюдаемых в текущем исследовании.

Наши исследования также, по-видимому, противоречат защитному эффекту печеночного LRP1 против печеночной инсулинорезистентности и стеатоза [20] и нейронального LRP1 в предотвращении непереносимости глюкозы в головном мозге [50]. В Ding et al. Согласно исследованию, инактивация LRP1 в гепатоцитах приводила к ожирению, инсулинорезистентности, гипергликемии и стеатозу печени, когда мышей переводили на диету с высоким содержанием жиров. Это происходило за счет подавления экспрессии рецептора инсулина и транслокации GLUT2 к плазматической мембране.Кроме того, исследование показало, что дефицит LRP1 гепатоцитов связан с усилением липогенеза за счет повышенной экспрессии Scd1 и Gpd1 . Различия между Ding et al. исследование и наше текущее исследование может быть связано с чрезмерным поглощением липидов макрофагами, экспрессирующими LRP1, поскольку мы ранее продемонстрировали, что LRP1 усиливает накопление холестерина и образование пенистых клеток в макрофагах [16]. Известно, что чрезмерное поглощение липидов макрофагами запускает сложную стерин-чувствительную сеть [51].

Независимо от его функции в эндоцитозе липопротеидов, текущее исследование показывает, что макрофаг LRP1 может также модулировать состояние активации GSK3 через несколько путей. GSK3 кодируется двумя разными генами, в результате чего образуются две изоформы, α и β , обладающие 97% гомологией. В отличие от других серин / треониновых киназ, GSK3 является конститутивно активным, и фосфорилирование GSK3 α по Ser21 и GSK3 β по Ser9 ингибирует активность киназы GSK3 [22].Большинство исследований функции и регуляции GSK3 было сосредоточено в первую очередь на изоформе β , и мало что известно о роли GSK3 α . Хотя изоформы имеют схожие функции, исследование Hoeflich et al. предположили, что GSK3 α неспособен компенсировать нарушение гена GSK3 β в эмбриональных стволовых клетках мыши 129J [52]. Исследования также показали, что GSK3 α , но не изоформа β , необходима для выживания кардиомиоцитов [53], а GSK3 α регулирует процессинг АРР и продукцию пептидов A β [54] в дополнение к его роль в формировании аксонов [55] и развитии коры [56].Интересно, что Patel et al. обнаружили, что тканеспецифическая делеция GSK3 α в скелетных мышцах или печени мышей не приводит к значительным различиям в чувствительности к глюкозе или инсулину по сравнению с однопометными животными дикого типа [57]. Эти результаты, по-видимому, противоречат результатам Ciaraldi et al. которые продемонстрировали, что нокдаун GSK3 α в культивируемых скелетных мышцах человека приводит к улучшенному действию инсулина [58].

В нашем текущем исследовании печень из ЛПНП — / — ; macLRP1 — / — мыши, получавшие западную диету в течение восьми недель, имели значительно более низкие уровни фосфорилированного GSK3 α (Ser21) по сравнению с LDLR — / — однопометников, что свидетельствует о более высоких уровнях активности GSK3 α ; однако мы не наблюдали каких-либо различий в фосфорилировании GSK3 β по Tyr216, которое важно для активности киназы.Эти результаты предполагают дифференциальную роль GSK3 α и GSK3 β в модели воспаления печени, вызванного диетой, и активность GSK3 в клетках Купфера, макрофагах, резидентных в печени, вероятно, способствует воспалительному состоянию печени. Необходимы дополнительные исследования, чтобы выявить перекрывающиеся и уникальные роли изоформ GSK3 в различных типах тканей. Анализ фосфопротеинов также выявил значительно более низкие уровни фосфорилированного p38 MAPK (T180, Y182) в LDLR — / — ; macLRP1 — / — печень.Исследования Thornton et al. продемонстрировали, что p38 MAPK способен фосфорилировать GSK3 β на С-конце, что приводит к инактивации GSK3 β и накоплению β -катенина [24]. Вероятно, что более низкие уровни фосфорилированного p38 MAPK приводят к меньшему ингибированию GSK3 β и увеличению деградации β -катенина, что способствует менее провоспалительному фенотипу, наблюдаемому в LDLR — / — ; macLRP1 — / — печень.Механизмы, с помощью которых макрофаг LRP1 модулирует активность p38 MAPK, в настоящее время неизвестны, и вероятно, что активность p38 MAPK модулируется посредством интеграции нескольких сигнальных путей.

Новости — Sicardi | Айерс | Бачино

Мелани Смит

Открытие 10-й ливерпульской биеннале 24 июля — 28 октября 2018 г.

10-я Ливерпульская биеннале, крупнейший фестиваль современного визуального искусства в Великобритании, открывается для публики в субботу, 14 июля 2018 года, отмечая свое 20-летие с выставками, представлениями, кинопоказами, семейными мероприятиями и беседами.Биеннале продлится 15 недель до 28 октября 2018 года в общественных местах Ливерпуля, галереях, музеях, общественных зданиях и в Интернете.

Мария Фернанда Кардосо и Лилиана Портер и другие

QUEENIE: Избранные работы художников-женщин | Эль-музей дель Баррио 21 марта — 23 июня 2018 г.

Анонимные женщины-ремесленницы из Чили, Таня Бругера, Кристина Эрнандес Ботеро, Маргарита Кабрера, Мелисса Кальдерон, Мария Фернанда Кардосо, Мельба Карилло, Марта Чилиндрон, Алессандра Экспосито, Илиана Эмилия Гарсия, Шерезад Гаросиаэ, Кармен Кесменика Гессера, Кармен Гессера Ломас Гарса, Эвелин Лопес де Гусман, Анна Мария Майолино, Глендалис Медина, Ана Мендьета, Марина Нуньес дель Прадо, Лилиана Портер, Ракель Рабинович, Ница Туфиньо

Extra Virgin Press — Страница 2 — Высокая печать в Майами

Аэропорт закупает работы у 14 художников, которые будут включены в коллекцию произведений искусства МВД

(Майами, 16 сентября 2020 г.) — Международный аэропорт Майами поддерживает экосистему местного искусства в округе Майами-Дейд во время пандемии, закупая работы у 14 местных художников.Произведения искусства будут представлены на выставке, запланированной на 2021 год, а затем они будут выставлены в различных местах по всему аэропорту.

14 произведений современного искусства, состоящие из картин, фотографий и работ на бумаге, были отобраны в ходе строгого процесса отбора группой из шести человек, в которую входили местные специалисты в области искусства и музейного дела, включая кураторов и администраторов программ паблик-арта. Члены жюри во время первого звонка MIA артистам, объявленного в июле, рассмотрели 253 заявки от 157 художников.Заявки на рассмотрение должны были представлять собой существующие двумерные произведения искусства, созданные в течение последних трех лет художниками, продемонстрировавшими опыт работы в сфере паблик-арта и / или имеющими историю выставок произведений искусства в галереях, музеях и пространствах альтернативного искусства. Художники также должны были жить и работать в округе Майами-Дейд.

«Цели этой инициативы по приобретению — продемонстрировать широкий и разнообразный спектр талантов, которые может предложить наше местное художественное сообщество, и разделить наше финансирование между несколькими работающими художниками в то время, когда возможностей меньше», — сказал Джендри Шерер, Директор отдела изобразительного искусства и культуры МВД.«Мы также гордимся тем, что продолжаем представлять выставки через галереи MIA, где художники Южной Флориды могут ежедневно выставлять свои работы перед международной аудиторией».

Окончательно отобранные художники составляют разнообразную группу из разных художественных практик: Мария Тереза ​​Барбист; Лухан Кандрия; Амалия Капуто; Кара Деспейн; Анник Дювивье; Кэрол Джаззар; Регина Джестроу; Моника Лопес де Виктория; Аддонис Паркер; Наджа Мун; Ян Патрик О’Коннор; Кристина Петтерссон; Сильвия Рос; и Том Девственница.

«Я хочу поблагодарить MIA за эту возможность выставить мои работы в аэропорту», ​​- сказал Дювивье.

Отставить комментарий

Обязательные для заполнения поля отмечены*